以病毒侵染性克隆為基礎(chǔ)的反向遺傳學(xué)技術(shù)體系是現(xiàn)代分子病毒學(xué)研究中最基本、最重要的技術(shù)手段。植物負(fù)鏈RNA病毒包括多種在作物生產(chǎn)上造成嚴(yán)重危害的病毒,如水稻條紋病毒是我國水稻上的重要病害之一,番茄斑萎病毒在世界范圍內(nèi)引起多種作物的毀滅性病害。然而,由于技術(shù)上的困難,20多年以來,國際上一直未能突破植物負(fù)鏈RNA病毒的侵染性克隆技術(shù),反向遺傳學(xué)技術(shù)體系的缺失嚴(yán)重限制了這類病毒的分子生物學(xué)研究。
農(nóng)學(xué)院植物病毒研究團(tuán)隊以植物負(fù)鏈彈狀病毒(Rhabdovirus)——苦苣菜黃網(wǎng)病毒為模式,歷經(jīng)數(shù)年的努力,成功解決了制約植物負(fù)鏈RNA病毒研究的技術(shù)難題,實現(xiàn)了病毒全長cDNA侵染性克隆技術(shù)的突破,獲得了與野生型病毒具有同等侵染活性的重組病毒。在此基礎(chǔ)上,本研究還發(fā)現(xiàn),該病毒基因組內(nèi)可插入外源基因片段,且在插入片段的穩(wěn)定性和包容性方面較其他類型的植物病毒具有明顯的優(yōu)勢,適合于作為病毒載體表達(dá)外源基因。此外,本研究利用反向遺傳學(xué)方法進(jìn)一步解析了包膜病毒胞間運動、系統(tǒng)運動和粒子形態(tài)建成等過程,為該類病毒的生物學(xué)提供了新的見解,并為其它相關(guān)病毒的反向遺傳學(xué)研究提供了可供借鑒的模版。
研究工作投稿后得到了3位匿名評審專家一致的高度評價,認(rèn)為本研究“有望革命性地改變植物負(fù)鏈RNA病毒生物學(xué)(expected to revolutionize plant NSR virus biology in future)”。該研究論文“Rescue of a Plant Negative-Strand RNA Virus from Cloned cDNA: Insights into Enveloped Plant Virus Movement and Morphogenesis”已于近期在微生物學(xué)權(quán)威期刊PLoS Pathogens(IF5 = 8.364)在線發(fā)表,并得到該雜志網(wǎng)站在線重點推介。農(nóng)學(xué)院生物所博士生王強、碩士生馬曉楠和博士生錢莎莎為該論文的共同第一作者,李正和教授為通訊作者,其他合作作者包括農(nóng)學(xué)院周雪平教授以及美國加州大學(xué)伯克利分校Andrew Jackson教授等。該研究得到國家自然科學(xué)優(yōu)秀青年基金和973課題等項目的資助。
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論文全文:http://journals.plos.org/plospathogens/article?id=10.1371/journal.ppat.1005223
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