黃善金課題組揭示自交不親和花粉管中微絲動(dòng)態(tài)變化的分子基礎(chǔ)及調(diào)控機(jī)制
自交不親和性是植物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的一種生殖隔離機(jī)制，通過(guò)阻止自交促進(jìn)異交保證植物的遺傳多樣性，有利于植物進(jìn)化和適應(yīng)環(huán)境。在作物遺傳改良和雜種優(yōu)勢(shì)利用上具有重要的價(jià)值。根據(jù)遺傳控制特性，自交不親和性可以分為配子體自交不親和和孢子體自交親和兩種類型。罌粟的自交不親和性屬于配子體自交不親和。目前其分子控制機(jī)制已經(jīng)清楚，即柱頭通過(guò)分泌一種叫PrsS蛋白和花粉表面的PrpS蛋白互作引發(fā)花粉自交不親和反應(yīng)。由于罌粟花粉自交不親和反應(yīng)能在體外進(jìn)行重組，所以目前對(duì)于自交不親和花粉管中發(fā)生的細(xì)胞學(xué)事件在該系統(tǒng)中了解得相對(duì)較為清楚。
在罌粟自交不親和的花粉管中，出現(xiàn)鈣離子梯度的消失和鈣離子濃度上升、微絲骨架劇烈重排和細(xì)胞程序性死亡等。自交不親和花粉管中微絲骨架的變化比較特殊，發(fā)生大量的解聚同時(shí)形成特別穩(wěn)定的微絲結(jié)構(gòu)命名為“actin foci”。由于微絲輕微的變化就足夠抑制花粉管生長(zhǎng)，人們對(duì)于自交不親和花粉管中微絲為什么需要發(fā)生這么劇烈的變化一直很好奇。此外，人們對(duì)自交不親和花粉管中微絲骨架變化如何實(shí)現(xiàn)也很好奇。Noni Franklin-Tong實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)，當(dāng)把罌粟自交不親和遺傳控制系統(tǒng)移植到擬南芥中，自交的擬南芥花粉也出現(xiàn)不親和反應(yīng)。這一方面說(shuō)明自交不親和反應(yīng)利用了植物細(xì)胞中保守的細(xì)胞學(xué)通路和元件。另一方面，也為人們充分利用擬南芥強(qiáng)大的遺傳學(xué)手段和資源深入探究自交不親和反應(yīng)的分子和細(xì)胞學(xué)機(jī)制提供了條件。
2020年2月11日，清華大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院黃善金課題組在細(xì)胞生物學(xué)期刊Journal of Cell Science在線發(fā)表題為“villin蛋白控制花粉管actin foci結(jié)構(gòu)的形成和增大”（Villin Controls the Formation and Enlargement of Punctate Actin Foci in Pollen Tubes）的研究論文。該研究利用活體成像的方法揭示了自交不親和花粉管微絲骨架動(dòng)態(tài)變化的分子基礎(chǔ)，并綜合遺傳學(xué)和生物化學(xué)等手段發(fā)現(xiàn)villin蛋白參與其中控制微絲骨架的動(dòng)態(tài)變化。
圖1. S蛋白處理和鈣離子通透劑處理引起花粉管類似的微絲骨架變化，再現(xiàn)罌粟花粉管自交不親和反應(yīng)
研究人員首先發(fā)現(xiàn)擬南芥花粉管在PrpS蛋白的處理下微絲骨架發(fā)生劇烈重排，并逐漸形成點(diǎn)狀的結(jié)構(gòu)。隨著處理時(shí)間的變長(zhǎng)，微絲結(jié)構(gòu)幾乎全部都變成點(diǎn)狀的結(jié)構(gòu) （圖1B）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)鈣離子通透劑處理花粉管中也形成類似的微絲結(jié)構(gòu)（圖1A）。這和自交不親和罌粟花粉管中微絲骨架的變化極其類似。
圖2.鈣離子濃度升高時(shí)花粉管微絲骨架動(dòng)態(tài)變化過(guò)程
接著，為了揭示微絲變化過(guò)程的細(xì)節(jié)，研究人員利用活體成像的辦法觀察花粉管中微絲的變化過(guò)程。發(fā)現(xiàn)微絲在早期階段先發(fā)生一定程度的重排，從和花粉管伸長(zhǎng)軸平行排布變成網(wǎng)絡(luò)狀的結(jié)構(gòu)，然后微絲發(fā)生片段化（圖2A，B）。整體來(lái)看，熒光強(qiáng)度是在下降的（圖2C），表明微絲發(fā)生了解聚。通過(guò)實(shí)時(shí)追蹤點(diǎn)狀微絲結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)點(diǎn)狀微絲結(jié)構(gòu)逐漸變大形成actin foci（圖2D，E），這和過(guò)去報(bào)道的結(jié)果類似。進(jìn)一步的觀察發(fā)現(xiàn)片段化的微絲結(jié)構(gòu)會(huì)相互交聯(lián)在一塊形成大的actin foci（圖2F-I），表明actin foci的形成主要通過(guò)將片段化的細(xì)小微絲結(jié)構(gòu)交聯(lián)在一起而產(chǎn)生。這與過(guò)去推測(cè)actin foci是由微絲原位聚合而來(lái)的說(shuō)法有出入。
圖3.鈣離子濃度上升的過(guò)程中villin在花粉管中和微絲共定位
為了闡明花粉管中微絲變化的調(diào)控機(jī)制，研究人員接著驗(yàn)證了具有鈣離子依賴的微絲切割活性的villin蛋白是否參與其中。首先發(fā)現(xiàn)鈣離子引起的微絲骨架變化過(guò)程中，villin和各微絲結(jié)構(gòu)共定位（圖3）。接下來(lái)，分析了villin功能缺失突變體花粉管中鈣離子引起的微絲變化過(guò)程，發(fā)現(xiàn)和野生型花粉管相比，微絲變化過(guò)程顯著受阻，表明villin對(duì)于鈣離子引起的微絲變化過(guò)程至關(guān)重要。后續(xù)的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)缺失微絲切割能力的villin蛋白在花粉管內(nèi)缺失使微絲片段化合解聚的能力（圖4），表明villin蛋白在花粉管中通過(guò)其微絲切割活性促進(jìn)微絲片段化。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)villin蛋白缺失微絲成束活性但保留微絲切割活性，花粉管中微絲片段化能發(fā)生但actin foci的變大過(guò)程受阻。表明villin通過(guò)其微絲成束活性使actin foci變大。這些發(fā)現(xiàn)支持上面的觀察，即actin foci的形成主要是通過(guò)將短而小的微絲結(jié)構(gòu)交聯(lián)在一起。
圖4.去除villin蛋白的微絲切割活性影響花粉管微絲片段化和解聚
這項(xiàng)研究幫助人們了解自交不親和花粉管中微絲動(dòng)態(tài)變化的分子基礎(chǔ)。具體來(lái)說(shuō)，花粉管中微絲骨架經(jīng)歷了片段化、解聚和形成actin foci以及其變大的過(guò)程。該項(xiàng)研究加深了人們對(duì)花粉管自交不親和反應(yīng)的細(xì)胞學(xué)機(jī)制的理解。目前對(duì)于花粉管為什么需要形成特別穩(wěn)定的actin foci結(jié)構(gòu)，也就是說(shuō)actin foci結(jié)構(gòu)是否具有特殊的生物學(xué)功能還有待于揭示。
黃善金實(shí)驗(yàn)室的博士生趙婉瀅、已出站博士后屈曉璐和博士生莊宇慧為本文的共同第一作者。參與該論文的還有伯明翰大學(xué)Noni Franklin-Tong教授、阿伯里斯特大學(xué)Maurice Bosch博士和Ludi Wang博士以及中科院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所薛勇彪研究員。黃善金研究員為本文的通訊作者。該研究受到國(guó)家自然科學(xué)基金委和清華大學(xué)的資助。
文章鏈接：
https://jcs.biologists.org/content/early/2020/02/11/jcs.237404
版權(quán)與免責(zé)聲明：本網(wǎng)頁(yè)的內(nèi)容由收集互聯(lián)網(wǎng)上公開(kāi)發(fā)布的信息整理獲得。目的在于傳遞信息及分享，并不意味著贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其真實(shí)性，也不構(gòu)成其他建議。僅提供交流平臺(tái)，不為其版權(quán)負(fù)責(zé)。如涉及侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系我們及時(shí)修改或刪除。郵箱：sales@allpeptide.com