清華大學醫(yī)學院郭永實驗室合作研發(fā)出基于數(shù)字PCR的遺傳性耳聾無創(chuàng)檢測新方法 時間：2018-11-23
近日，清華大學醫(yī)學院生物醫(yī)學工程系郭永實驗室合作在《Analytical Chemistry》發(fā)表題為”Noninvasive and Accurate Detection of Hereditary Hearing Loss Mutations with Buccal Swab Based on Droplet Digital PCR”的研究論文，該研究以數(shù)字PCR技術為基礎，以口腔拭子為檢材，建立了一種精準可靠、靈敏度高、適合在人群中開展耳聾基因突變無創(chuàng)檢測的新方法。
耳聾是一種常見的遺傳病，遺傳異質性高、人群攜帶率高，診斷價值大，普篩需求大。中國遺傳性耳聾的突變基因攜帶率約4-5%，發(fā)病率約為1-3/1000，每年大約新增6萬聾兒。目前耳聾突變檢測方法有基因芯片、質譜、基因測序等技術，檢測樣本來源主要是成人靜脈血、新生兒足跟血，需要針刺取樣，屬于侵入性取樣方式。基于上述技術開發(fā)的遺傳性耳聾無創(chuàng)檢測方法較少報道。
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數(shù)字PCR作為一種新興并快速發(fā)展的檢測技術，具有單分子檢測靈敏度和絕對定量的能力，在生物、醫(yī)學、農業(yè)和檢驗檢疫領域引起廣泛關注。本研究基于數(shù)字PCR的高靈敏度和絕對定量的優(yōu)勢，以口腔拭子為檢測樣本，建立了一種耳聾無創(chuàng)檢測新方法。該研究對耳聾8個常見突變位點檢測的特異性、動態(tài)范圍、最低檢測限等重要參數(shù)進行了系統(tǒng)驗證，通過無創(chuàng)取樣的口腔拭子對方法的準確性和臨床適用性進行了研究，見圖1。研究顯示，該方法特異性為100%，最低檢測限為5拷貝，在10-105拷貝范圍內定量的準確性和重復性較好，并實現(xiàn)了對藥物性耳聾低至1%的突變異質率精準定量檢測，所有臨床樣本檢測結果與Sanger測序一致率為100%。
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圖1.耳聾基因突變無創(chuàng)檢測方法示意圖
該研究對口腔拭子在不同保存條件下的有效期進行了研究，結果顯示口腔拭子無論是在常溫還是-20℃保存，經過長達90天的保存仍能被數(shù)字PCR技術準確檢出，這為口腔拭子在常溫運輸和保存后進行檢測提供了科學基礎?；跀?shù)字PCR對口腔拭子樣本進行檢測，樣本易得，靈敏度高，準確可靠，具有良好的臨床適用性和規(guī)?；Y查應用潛力。
已畢業(yè)博士生王芳為本文第一作者，郭永研究員對該研究進行了合作指導，這項研究得到了解放軍總醫(yī)院、博奧生物集團有限公司和北京新羿生物科技有限公司的大力支持。本課題得到國家自然科學基金委、中央公益性科研機構基金、企業(yè)橫向合作課題等的經費資助。
◎論文鏈接：
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b01096
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