清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院郭永課題組合作在《Journal of Clinical Microbiology》發(fā)表文章，報(bào)道不同滅活方法對新型冠狀病毒核酸檢出率的影響
新冠肺炎（COVID-19）目前在全世界多個國家爆發(fā)流行，新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）核酸檢測目前是實(shí)驗(yàn)室病原檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。為保護(hù)實(shí)驗(yàn)室檢測人員不受感染，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用滅活標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測。西安市疾病預(yù)防控制中心馬超鋒團(tuán)隊(duì)和清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院郭永團(tuán)隊(duì)合作，利用絕對定量的微滴數(shù)字PCR（ddPCR）技術(shù)檢測新冠病毒N基因和ORF 1ab基因，比較了TRIzol 試劑、不同溫度的熱滅活方法對臨床樣本中新型冠狀病毒基因拷貝數(shù)的影響，為實(shí)驗(yàn)室選擇適宜滅活方法且提高檢出率提供了科學(xué)依據(jù)。該研究結(jié)果于5月28日在Journal of Clinical Microbiology發(fā)表（doi:10.1128/JCM.00958-20）。
該研究收集了61份新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）核酸檢測陽性的鼻咽拭子標(biāo)本，采用了以下幾種滅活方法：1、TRIzol試劑在室溫下滅活10分鐘；2、在56℃水浴中加熱30分鐘；3、高溫處理，包括121℃高壓20分鐘、100℃沸水浴煮沸20分鐘、80℃水浴加熱20分鐘。該研究發(fā)現(xiàn)，與原始樣品中的RNA量相比，TRIzol處理破壞了47.54%的N基因和39.85%的ORF 1ab基因；56℃30分鐘加熱處理后，N基因和ORF 1ab拷貝數(shù)分別減少48.55%和56.40%；在80℃加熱20分鐘后，病毒RNA拷貝數(shù)下降了50-66%；121℃高壓滅菌或100℃煮沸20分鐘破壞了絕大部分病毒RNA，幾乎未檢測到病毒RNA。
圖1. TRIzol室溫10分鐘處理對生物標(biāo)本中新冠病毒基因拷貝數(shù)的影響
圖2. 56℃加熱30分鐘處理對生物標(biāo)本中新冠病毒基因拷貝數(shù)的影響
圖3. 80℃、100℃及121℃加熱20分鐘處理對生物標(biāo)本中新冠病毒基因拷貝數(shù)的影響
該研究結(jié)果表明，滅活降低了可檢測到的病毒RNA數(shù)量，尤其對于弱陽性標(biāo)本，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。相較于熱滅活，TRIzol處理對病毒核酸拷貝數(shù)影響更小，因此推薦使用TRIzol對臨床樣本進(jìn)行滅活處理。
吳瑞、陳海龍、邢遠(yuǎn)為該研究的共同第一作者，馬超鋒和郭永為該研究的共同通訊作者。該項(xiàng)目受到西安市新型冠狀病毒肺炎疫情應(yīng)急防治專項(xiàng)項(xiàng)目、清華大學(xué)疫情防控科技攻關(guān)應(yīng)急課題、北京市科委新冠肺炎應(yīng)急項(xiàng)目、新羿生物等單位或項(xiàng)目的支持。
https://jcm.asm.org/content/early/2020/05/28/JCM.00958-20
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