Toehold-initiated Rolling Circle Amplification for Visualizing Individual MicroRNAs in situ in Single Cells
miRNA是細(xì)胞內(nèi)具有重要基因表達(dá)調(diào)控功能的短鏈RNA，其異常表達(dá)與癌癥、心血管疾病及神經(jīng)性疾病相關(guān)。在單細(xì)胞單分子水平上的miRNA原位成像對(duì)miRNA介導(dǎo)的基因調(diào)控通路及其疾病相關(guān)性研究具有重要意義。但由于miRNA序列短，序列相似度高以及表達(dá)量少，miRNA原位成像及定量分析面臨挑戰(zhàn)。我系李景虹教授課題組構(gòu)造了一種具有開(kāi)關(guān)結(jié)構(gòu)的啞鈴形環(huán)模板，利用核酸的鏈置換啟動(dòng)滾環(huán)放大反應(yīng)（Rolling circle amplification），實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)miRNA的高特異性識(shí)別和原位放大（見(jiàn)下圖）。該方法能夠在常溫下實(shí)現(xiàn)對(duì)序列高度相似的與肺癌發(fā)生相關(guān)的let-7家族的特異性識(shí)別，并在3h內(nèi)實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞內(nèi)單個(gè)miRNA的原位成像。該方法將有助于我們認(rèn)識(shí)miRNA在細(xì)胞內(nèi)的功能及其相關(guān)疾病發(fā)生的分子機(jī)理。該工作發(fā)表在Angew. Chem. Int. Ed. DOI: 10.1002/anie.201309388，并被選為當(dāng)期的VIP文章。
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