??? 糖蛋白是最常見的蛋白質(zhì)類型,在生物體中具有多種重要的作用和功能。此外,糖蛋白具有重要的臨床診斷價(jià)值,目前用于疾病診斷的蛋白質(zhì)疾病標(biāo)志物大多為糖蛋白。由于具有重要生理意義或診斷價(jià)值的糖蛋白的表達(dá)豐度極低,對(duì)復(fù)雜樣品體系中糖蛋白的專一識(shí)別和靈敏檢測(cè)是重要的挑戰(zhàn)性課題。免疫分析是臨床診斷等許多領(lǐng)域中的重要研究工具,但存在著明顯的缺點(diǎn),如高專一性抗體不易獲得、酶和抗體等生物試劑的穩(wěn)定性差、化學(xué)標(biāo)記試劑對(duì)健康有害和對(duì)樣品環(huán)境敏感等。分子印跡(Molecular imprinting)是制備具有類似抗體專一識(shí)別性能的仿生識(shí)別材料的重要技術(shù)。劉震教授研究組近年在分子印跡領(lǐng)域連續(xù)取得進(jìn)展,建立了普適高效的硼親和分子印跡法,制備出性能先進(jìn)的分子印跡聚合物,并將其替代免疫分析中的一抗,成功應(yīng)用于疾病標(biāo)志物糖蛋白的檢測(cè)(Angew. Chem. Int. Ed. 2013, 52, 7451-7454; Chem. Sci. 2014, 5, 1135-1140; Anal. Chem. 2014, 86, 959-966)。該研究組近期進(jìn)一步將分子印跡技術(shù)與表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)相結(jié)合,發(fā)展出免抗體、免酶的高專一性、高靈敏度糖蛋白檢測(cè)方法—硼親和夾心法。表面增強(qiáng)拉曼散射具有高靈敏度、無(wú)需有毒有害試劑和對(duì)樣品環(huán)境不敏感等優(yōu)點(diǎn)。該方法利用硼親和分子印跡聚合物與硼親和表面增強(qiáng)拉曼散射探針對(duì)目標(biāo)糖蛋白進(jìn)行雙重識(shí)別以保證分析的專一性,同時(shí)利用表面增強(qiáng)拉曼散射提供高靈敏檢測(cè)。該方法成功應(yīng)用于人血清肝癌標(biāo)志物甲胎蛋白的檢測(cè),克服了常規(guī)免疫分析的缺點(diǎn),且具有成本低、穩(wěn)定性和分析速度快等優(yōu)點(diǎn)。該方法為普適性方法,可適用于各種糖蛋白。此外,若與手持式或便攜式拉曼光譜儀聯(lián)用,可應(yīng)用于床旁檢測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。該方法在臨床診斷、興奮劑檢測(cè)和質(zhì)量控制等領(lǐng)域具有重要應(yīng)用前景。該工作7月28日在線發(fā)表于Angew. Chem. Int. Ed. 2014, DOI: 10.1002/anie.201405525。該論文第一作者為碩士生葉金。該工作得到國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目和國(guó)家重大科學(xué)研究計(jì)劃等基金的經(jīng)費(fèi)支持。
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圖1. 硼親和夾心法識(shí)別與檢測(cè)原理
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圖2. 硼親和夾心法的靈敏度試驗(yàn)(a)及專一性試驗(yàn)(b) |
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