400-998-5282
專注多肽 服務(wù)科研
具有高度選擇性的 NK2 受體激動劑。
編號:165007
CAS號:137565-28-7
單字母:H2N-DKFVG-(NMe)L-Nle-CONH2
編號: | 165007 |
中文名稱: | 七肽DKFVG-(NMe)L-Nle-NH2 |
英文名: | [Lys5, MeLeu9, NIe10]-NeurokininA(4-10) |
CAS號: | 137565-28-7 |
單字母: | H2N-DKFVG-(NMe)L-Nle-CONH2 |
三字母: | H2N N端氨基 -Asp天冬氨酸 -Lys賴氨酸 -Phe苯丙氨酸 -Val纈氨酸 -Gly甘氨酸 -(NMe)LeuN甲基化亮氨酸 -Nle正亮氨酸 -CONH2C端酰胺化 |
氨基酸個數(shù): | 7 |
分子式: | C39H65N9O9 |
平均分子量: | 803.99 |
精確分子量: | 803.49 |
等電點(diǎn)(PI): | 9.71 |
pH=7.0時的凈電荷數(shù): | 0.98 |
平均親水性: | -0.26666666666667 |
疏水性值: | 0.97 |
外觀與性狀: | 白色粉末狀固體 |
消光系數(shù): | - |
來源: | 人工化學(xué)合成,僅限科學(xué)研究使用,不得用于人體。 |
純度: | 95%、98% |
鹽體系: | 可選TFA、HAc、HCl或其它 |
生成周期: | 2-3周 |
儲存條件: | 負(fù)80℃至負(fù)20℃ |
標(biāo)簽: | 氨基酸衍生物肽 甲基化修飾肽 |
[Lys5,MeLeu9,Nle10]-NKA(4-10) 是具有高度選擇性的 NK2 受體激動劑,其 IC50 值為 6.1 nM。
[Lys5,MeLeu9,Nle10]-NKA(4-10) is a highly selective and potent NK2 receptor agonist, with an IC50 of 6.1 nM[1].
甲基化修飾多肽
也叫甲基化標(biāo)記多肽,甲基化修飾是蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)的一種,幾乎參與細(xì)胞所有的生命活動過程,發(fā)揮著重要的調(diào)控作用,蛋白質(zhì)在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下將甲基轉(zhuǎn)移至特定的氨基酸殘基上共價(jià)結(jié)合的過程。甲基化是一種可逆的修飾過程,由去甲基化酶催化去甲基化作用。
研究發(fā)現(xiàn),常見甲基化/去甲基化作用的氨基酸主要是賴氨酸(Lys)和精氨酸(Arg)研究表明,組蛋白賴氨酸甲基化修飾執(zhí)行著多種生物學(xué)功能,如干細(xì)胞的維持和分化、X染色體失活、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和DNA損傷反應(yīng)等,主要是影響染色質(zhì)濃縮,抑制基因表達(dá)。組蛋白精氨酸甲基化在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮著重要作用,并能影響細(xì)胞的多種生理過程,包括DNA修復(fù)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞發(fā)育及癌癥發(fā)生等因此專肽生物特地開發(fā)甲基化修飾多肽技術(shù),為科學(xué)家在蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMS)的研究中提供幫助。
甲基化修飾(Me1,Me2,Me3)
采用高品質(zhì)的Fmoc-Lys(Me,Boc)-OH、 Fmoc-Lys(Me2)-OH、Fmoc-Lys(Me3)-OH.HCL、Fmoc-Arg(Me,Pbf)-OH 、Fmoc-Arg(me)2-OH.HCl(asymmetrical) 、Fmoc-Arg(me)2-OH.HCl(symmetrical) 等原料,采用Fmoc固相合成工藝合成,得到Lys甲基化,Arg甲基化標(biāo)記的多肽,使用HPLC 對產(chǎn)物進(jìn)行純化。最終產(chǎn)品提供相應(yīng)的質(zhì)譜圖,純度分析的HPLC 色譜圖。
G Chassaing, et al. Selective agonists of NK-2 binding sites highly active on rat portal vein (NK-3 bioassay). Neuropeptides. 1991 Jun;19(2):91-5. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/1658676
M A Matuszek, et al. An investigation of tachykinin NK2 receptor subtypes in the rat. Eur J Pharmacol. 1998 Jul 3;352(1):103-9. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9718274
多肽H2N-Asp-Lys-Phe-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-NH2的合成步驟:
1、合成MBHA樹脂:取若干克的MBHA樹脂(如初始取代度為0.5mmol/g)和1倍樹脂摩爾量的Fmoc-Linker-OH加入到反應(yīng)器中,加入DMF,攪拌使氨基酸完全溶解。再加入樹脂2倍量的DIEPA,攪拌混合均勻。再加入樹脂0.95倍量的HBTU,攪拌混合均勻。反應(yīng)3-4小時后,用DMF洗滌3次。用2倍樹脂體積的10%乙酸酐/DMF 進(jìn)行封端30分鐘。然后再用DMF洗滌3次,甲醇洗滌2次,DCM洗滌2次,再用甲醇洗滌2次。真空干燥12小時以上,得到干燥的樹脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin},測定取代度。這里測得取代度為 0.3mmol/g。結(jié)構(gòu)如下圖:
2、脫Fmoc:取1.49g的上述樹脂,用DCM或DMF溶脹20分鐘。用DMF洗滌2遍。加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液,鼓氮?dú)?0分鐘,然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。(此步驟脫除Fmoc基團(tuán),茚三酮檢測為藍(lán)色,Pip為哌啶)。結(jié)構(gòu)圖如下:
3、縮合:取1.34mmol Fmoc-Nle-OH 氨基酸,加入到上述樹脂里,加適當(dāng)DMF溶解氨基酸,再依次加入2.68mmol DIPEA,1.27mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后,取小樣洗滌,茚三酮檢測為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。(洗滌樹脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備)。得到Fmoc-Nle-Linker-MBHA Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:樹脂=3:6:2.85:1(摩爾比)。結(jié)構(gòu)圖如下:
4、依次循環(huán)步驟二、步驟三,依次得到
H2N-Nle-Linker-MBHA Resin
Fmoc-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
H2N-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
H2N-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
H2N-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Phe-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
H2N-Phe-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
H2N-Lys(Boc)-Phe-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Phe-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin
以上中間結(jié)構(gòu),均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中,一鍵畫出。
最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Phe-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-Linker-MBHA Resin,結(jié)構(gòu)如下:
5、切割:6倍樹脂體積的切割液(或每1g樹脂加8ml左右的切割液),搖床搖晃 2小時,過濾掉樹脂,用冰無水乙醚沉淀濾液,并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次,最后將沉淀物放真空干燥釜中,常溫干燥24小試,得到粗品H2N-Asp-Lys-Phe-Val-Gly-(NMe)Leu-Nle-NH2。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。
切割液選擇:1)TFA:H2O=95%:5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。)
6、純化凍干:使用液相色譜純化,收集目標(biāo)峰液體,進(jìn)行凍干,獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復(fù)測下純度 是否目標(biāo)純度。
7、最后總結(jié):
杭州專肽生物技術(shù)有限公司(ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com)主營定制多肽合成業(yè)務(wù),提供各類長肽,短肽,環(huán)肽,提供各類修飾肽,如:熒光標(biāo)記修飾(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基團(tuán)修飾肽(疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素標(biāo)記肽(N15、C13),訂書肽(Stapled Peptide),脂肪酸修飾肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修飾肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),環(huán)肽(酰胺鍵環(huán)肽、一對或者多對二硫鍵環(huán)),生物素標(biāo)記肽,PEG修飾肽,甲基化修飾肽
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