R-486 (MEN10295), potent and selective NK-3 receptor antagonist, as demonstrated by antagonism against neurokinin B on the NK-3 receptor of the rat portal vein.

定義
神經(jīng)肽的長(zhǎng)度為3-40個(gè)氨基酸，可作為神經(jīng)遞質(zhì)。它們廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)。

發(fā)現(xiàn)
神經(jīng)肽是由約翰·休斯博士和科斯特里茨博士于1975年發(fā)現(xiàn)的。它們是內(nèi)啡肽，內(nèi)在產(chǎn)生的嗎啡樣物質(zhì)，會(huì)在體內(nèi)產(chǎn)生一系列類(lèi)似藥物的作用?？梢詮男蛄行畔?中鑒定神經(jīng)肽前體mRNA序列，并且得到的翻譯蛋白序列包括信號(hào)肽序列和一個(gè)或多個(gè)神經(jīng)肽。廣泛而復(fù)雜的一系列酶處理步驟，包括被激素或前蛋白轉(zhuǎn)化酶切割以及其他翻譯后修飾，在創(chuàng)建活性神經(jīng)肽之前就發(fā)生在翻譯后的蛋白質(zhì)序列上  2,3。

結(jié)構(gòu)特征
通過(guò)核磁共振（NMR）光譜研究了幾種來(lái)自軟體動(dòng)物的類(lèi)似神經(jīng)肽的構(gòu)象性質(zhì)。肽的N末端可變區(qū)中的氨基酸取代對(duì)溶液中反向轉(zhuǎn)化的種群具有顯著影響。通過(guò)使用兩個(gè)獨(dú)立的NMR參數(shù)測(cè)得的轉(zhuǎn)彎數(shù)，發(fā)現(xiàn)使用Helix aspersa的受體膜制劑與IC50值高度相關(guān)（r2 = 0.93和0.82）。這些結(jié)果表明，構(gòu)象集合降低了特定肽相對(duì)于特定受體4,5的有效濃度。

神經(jīng)肽Y與人肽相同，并且與禽胰多肽高度同源。神經(jīng)肽Y和禽胰多肽之間的同源性保留了維持三級(jí)結(jié)構(gòu)必不可少的所有殘基。結(jié)果表明，神經(jīng)肽保留了緊湊的三級(jí)結(jié)構(gòu)，其特征是在N末端的聚脯氨酸II類(lèi)螺旋和C末端的a螺旋 6之間廣泛的疏水相互作用。

已經(jīng)通過(guò)許多孤兒受體之一發(fā)現(xiàn)了一些肽，這些受體是內(nèi)源性配體未知的受體，例如“類(lèi)阿片受體樣1”（ORL1）。隨后，已闡明該ORL1受體的內(nèi)源性激動(dòng)劑的結(jié)構(gòu)，一種稱(chēng)為孤兒蛋白FQ或傷害感受蛋白的17個(gè)氨基酸的肽7。

行動(dòng)方式
神經(jīng)肽是由神經(jīng)元作為細(xì)胞間信使釋放的肽。一些神經(jīng)肽充當(dāng)神經(jīng)遞質(zhì)，而另一些充當(dāng)激素。神經(jīng)肽既可以為我們提供支持，也可以為我們提供幫助。抗炎神經(jīng)肽可幫助我們減少皮膚發(fā)炎。神經(jīng)肽是自然產(chǎn)生的，可以在非常有限的時(shí)間內(nèi)與靶細(xì)胞膜受體在明確的作用位點(diǎn)相互作用。因此，大多數(shù)這些內(nèi)源性化合物的特征在于低的生物屏障滲透性和非常高的酶促降解敏感性。腦室內(nèi)或全身注射神經(jīng)肽Y（NPY）可使cast割的雌性大鼠血漿中的促黃體生成激素（LH）水平降低。6。

功能

生物功能，神經(jīng)肽控制著我們的情緒，能量水平，痛苦和愉悅感，體重以及解決問(wèn)題的能力；它們還會(huì)形成記憶，情感行為，食欲和發(fā)炎，修復(fù)疤痕和皺紋并調(diào)節(jié)我們的免疫系統(tǒng)。這些活躍的大腦小信使實(shí)際上打開(kāi)了皮膚7的細(xì)胞功能。因此，今天，與神經(jīng)肽系統(tǒng)相互作用的藥物設(shè)計(jì)是后基因組藥物化學(xué)研究最廣泛的途徑之一。

P物質(zhì)已被確定為負(fù)責(zé)傷害性信號(hào)傳遞的主要神經(jīng)肽。內(nèi)源性阿片類(lèi)藥物是天然神經(jīng)肽，負(fù)責(zé)傷害性信號(hào)的調(diào)節(jié)（通常是抑制）。

免疫系統(tǒng)，當(dāng)它們被分泌時(shí)，它們會(huì)激活自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞），從而增強(qiáng)我們的免疫系統(tǒng)。

隨著內(nèi)啡肽的分泌越來(lái)越多，血管病變使收縮的血管恢復(fù)到正常狀態(tài)，使血液以正常方式流動(dòng)。大多數(shù)成人疾病都始于血管堵塞。內(nèi)啡肽有助于改善血液循環(huán)。

內(nèi)啡肽通過(guò)去除超氧化物具有抗衰老作用。從呼吸進(jìn)入人體的氧氣可以轉(zhuǎn)變?yōu)槌趸?。這是造成人類(lèi)疾病和衰老的最大敵人之一。

抗壓力激素，應(yīng)對(duì)壓力的能力與我們體內(nèi)的內(nèi)啡肽水平成正比。

緩解疼痛的作用是，我們的神經(jīng)系統(tǒng)在接收到疼痛信號(hào)時(shí)會(huì)分泌神經(jīng)遞質(zhì)。一旦內(nèi)啡肽在疼痛的那一刻被釋放，內(nèi)啡肽就會(huì)與神經(jīng)元上的內(nèi)啡肽受體結(jié)合，從而阻止第一種神經(jīng)遞質(zhì)被分泌出來(lái)。

記憶力，神經(jīng)肽可以改善記憶力，因?yàn)樗鼈兛梢允鼓X細(xì)胞保持年輕健康。

參考

1.     Hummon AB, Richmond TA, Verleyen P, Baggerman G, Huybrechts J, Ewing MA, Vierstraete E, Rodriguez-Zas SL, Liliane SL, Robinson GE (2006). From the genome to the proteome: uncovering peptides in the Apis brain. Science, 27(314):647-649.

2.     Rockwell NC, Krysan DJ, Komiyama T, Fuller RS (2002). Precursor processing by Kex2/Furin Proteases. Chem. Rev., 102:4525–4548.

3.     Von ER, Beck-Sickinger AG (2004). Biosynthesis of peptide hormones derived from precursor sequences. Curr. Med. Chem.,11:2651–2665.

4.     Edison AS, Espinoza E, Zachariah C (1999). Conformational Ensembles: The Role of Neuropeptide Structures in Receptor Binding. The Journal of Neuroscience., 19(15):6318-6326.

5.     Payza K, Greenberg MJ, Price DA (1989). Further characterization of Helix FMRFamide receptors: kinetics, tissue distribution, and interactions with the endogenous heptapeptides. Peptides, 10:657-661.

6.     Allen J, Novotný J, Martin J, Heinrich G (1987). Molecular structure of mammalian neuropeptide Y: Analysis by molecular cloning and computer-aided comparison with crystal structure of avian homologue. PNAS., 84:2532-2536.

7.     Guya J, Lia S,  Pelletier G (1988). Studies on the physiological role and mechanism of action of neuropeptide Y in the regulation of luteinizing hormone secretion in the rat. Regulatory Peptides., 23(2):209-216.

多肽H2N-Asp-Ser-Phe-Trp-βAla-Leu-Met-NH2的合成步驟：

1、合成MBHA樹(shù)脂：取若干克的MBHA樹(shù)脂（如初始取代度為0.5mmol/g）和1倍樹(shù)脂摩爾量的Fmoc-Linker-OH加入到反應(yīng)器中，加入DMF，攪拌使氨基酸完全溶解。再加入樹(shù)脂2倍量的DIEPA，攪拌混合均勻。再加入樹(shù)脂0.95倍量的HBTU，攪拌混合均勻。反應(yīng)3-4小時(shí)后，用DMF洗滌3次。用2倍樹(shù)脂體積的10%乙酸酐/DMF 進(jìn)行封端30分鐘。然后再用DMF洗滌3次，甲醇洗滌2次，DCM洗滌2次，再用甲醇洗滌2次。真空干燥12小時(shí)以上，得到干燥的樹(shù)脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，測(cè)定取代度。這里測(cè)得取代度為 0.3mmol/g。結(jié)構(gòu)如下圖：

2、脫Fmoc：取1.76g的上述樹(shù)脂，用DCM或DMF溶脹20分鐘。用DMF洗滌2遍。加3倍樹(shù)脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取1.58mmol Fmoc-Met-OH 氨基酸，加入到上述樹(shù)脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入3.17mmol DIPEA，1.5mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測(cè)為無(wú)色。用2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌3次樹(shù)脂。（洗滌樹(shù)脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Met-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹(shù)脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Trp(Boc)-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Trp(Boc)-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Phe-Trp(Boc)-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Phe-Trp(Boc)-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Phe-Trp(Boc)-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Ser(tBu)-Phe-Trp(Boc)-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Phe-Trp(Boc)-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專(zhuān)肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫(huà)出。

最后再經(jīng)過(guò)步驟二得到 H2N-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Phe-Trp(Boc)-βAla-Leu-Met-Linker-MBHA Resin，結(jié)構(gòu)如下：

5、切割：6倍樹(shù)脂體積的切割液（或每1g樹(shù)脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過(guò)濾掉樹(shù)脂，用冰無(wú)水乙醚沉淀濾液，并用冰無(wú)水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品H2N-Asp-Ser-Phe-Trp-βAla-Leu-Met-NH2。結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒(méi)有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過(guò)這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。

7、最后總結(jié)：

杭州專(zhuān)肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com）主營(yíng)定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類(lèi)長(zhǎng)肽，短肽，環(huán)肽，提供各類(lèi)修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書(shū)肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽

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