SII血管緊張素II通過(guò)血管緊張素Ⅱ1A型受體激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1和2（ERK1/2）。激活依賴于β-抑制蛋白2的表達(dá)。

SII-Angiotensin II activates extracellular signal-regulated kinases 1 and 2 (ERK1/2) via angiotensin II type 1A receptors. Activation is dependent on β-arrestin 2 expression.

（Sar1，Ile4,8）-血管緊張素II通過(guò)血管緊張素Ⅱ1A型受體激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1和2（ERK1/2）。其激活依賴于β-抑制蛋白2的表達(dá)。

(Sar1,Ile4,8)-Angiotensin II activates extracellular signal-regulated kinases 1 and 2 (ERK1/2) through angiotensin II type 1A receptors. Its activation depends on the expression of β-arrestin 2.

甲基化修飾多肽
       也叫甲基化標(biāo)記多肽，甲基化修飾是蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMs）的一種，幾乎參與細(xì)胞所有的生命活動(dòng)過(guò)程，發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，蛋白質(zhì)在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下將甲基轉(zhuǎn)移至特定的氨基酸殘基上共價(jià)結(jié)合的過(guò)程。甲基化是一種可逆的修飾過(guò)程，由去甲基化酶催化去甲基化作用。
       研究發(fā)現(xiàn)，常見(jiàn)甲基化／去甲基化作用的氨基酸主要是賴氨酸（Lys）和精氨酸（Arg）研究表明，組蛋白賴氨酸甲基化修飾執(zhí)行著多種生物學(xué)功能，如干細(xì)胞的維持和分化、Ｘ染色體失活、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和ＤＮＡ損傷反應(yīng)等，主要是影響染色質(zhì)濃縮，抑制基因表達(dá)。組蛋白精氨酸甲基化在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮著重要作用，并能影響細(xì)胞的多種生理過(guò)程，包括DNA修復(fù)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞發(fā)育及癌癥發(fā)生等因此專(zhuān)肽生物特地開(kāi)發(fā)甲基化修飾多肽技術(shù)，為科學(xué)家在蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMS）的研究中提供幫助。

甲基化修飾(Me1，Me2，Me3)

       采用高品質(zhì)的Fmoc-Lys(Me,Boc)-OH、 Fmoc-Lys(Me2)-OH、Fmoc-Lys(Me3)-OH.HCL、Fmoc-Arg(Me,Pbf)-OH 、Fmoc-Arg(me)2-OH.HCl(asymmetrical) 、Fmoc-Arg(me)2-OH.HCl(symmetrical) 等原料，采用Fmoc固相合成工藝合成，得到Lys甲基化，Arg甲基化標(biāo)記的多肽，使用HPLC 對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。最終產(chǎn)品提供相應(yīng)的質(zhì)譜圖，純度分析的HPLC 色譜圖。
 

多肽H2N-Sar-Arg-Val-Ile-Ile-His-Pro-Ile-COOH的合成步驟：

1、合成CTC樹(shù)脂：稱取2.88g CTC Resin（如初始取代度約為1.1mmol/g）和3.8mmol Fmoc-Ile-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時(shí)CTC樹(shù)脂體積會(huì)增大好幾倍，避免DCM溶液過(guò)少），再加入9.5mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反應(yīng)2-3小時(shí)后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇，封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次（這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng)）。得到  Fmoc-Ile-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下：

2、脫Fmoc：加3倍樹(shù)脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Ile-CTC Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取9.5mmol Fmoc-Pro-OH 氨基酸，加入到上述樹(shù)脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入19.01mmol DIPEA，9.03mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測(cè)為無(wú)色。用2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌3次樹(shù)脂。（洗滌樹(shù)脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Pro-Ile-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹(shù)脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Pro-Ile-CTC Resin

Fmoc-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

H2N-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

Fmoc-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

H2N-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

Fmoc-Ile-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

H2N-Ile-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

Fmoc-Val-Ile-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

H2N-Val-Ile-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Val-Ile-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

H2N-Arg(Pbf)-Val-Ile-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

Fmoc-Sar-Arg(Pbf)-Val-Ile-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin

以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專(zhuān)肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫(huà)出。

最后再經(jīng)過(guò)步驟二得到 H2N-Sar-Arg(Pbf)-Val-Ile-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如下：

5、切割：6倍樹(shù)脂體積的切割液（或每1g樹(shù)脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過(guò)濾掉樹(shù)脂，用冰無(wú)水乙醚沉淀濾液，并用冰無(wú)水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品H2N-Sar-Arg-Val-Ile-Ile-His-Pro-Ile-COOH。結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒(méi)有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過(guò)這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。

7、最后總結(jié)：

杭州專(zhuān)肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com）主營(yíng)定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類(lèi)長(zhǎng)肽，短肽，環(huán)肽，提供各類(lèi)修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書(shū)肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽

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