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專(zhuān)注多肽 服務(wù)科研
一種血管緊張素 II (Angiotensin II) 的類(lèi)似物,是血管緊張素 AT1 受體的特異性激動(dòng)劑。(Sar1)-Angiotensin II 以 2.7 nM 的 Kd 值結(jié)合到富含腦膜的顆粒上。(Sar1)-Angiotensin II 可以刺激雛雞心肌細(xì)胞中的蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞生長(zhǎng)。
編號(hào):158522
CAS號(hào):51833-69-3/102029-89-0/2863657-02-5/1033008-45-5
單字母:H2N-Sar-RVYIHPF-OH
(Sar1)-Angiotensin II,一種血管緊張素 II (Angiotensin II) 的類(lèi)似物,是血管緊張素 AT1 受體的特異性激動(dòng)劑。(Sar1)-Angiotensin II 以 2.7 nM 的 Kd 值結(jié)合到富含腦膜的顆粒上。(Sar1)-Angiotensin II 可以刺激雛雞心肌細(xì)胞中的蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞生長(zhǎng)。
(Sar1)-Angiotensin II, an analogue of Angiotensin II, is a specific agonist of angiotensin AT1 receptor. (Sar1)-Angiotensin II binds to brain membrane-rich particles, with a Kd of 2.7 nM. (Sar1)-Angiotensin II can stimulate protein synthesis and cell growth in embryonic chick myocytes.
(Sar1)-血管緊張素II醋酸鹽是血管緊張素AT1受體的特異性激動(dòng)劑,與富含腦膜的顆粒結(jié)合,Kd為2.7nM。(Sar1)-血管緊張素II醋酸鹽可以刺激胚胎雞肌細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞生長(zhǎng)。
(Sar1)-Angiotensin II acetate is a specific agonist of the angiotensin AT1 receptor that binds to brain membrane-rich particles, with a Kd of 2.7 nM. (Sar1)-Angiotensin II acetate can stimulate protein synthesis and cell growth in embryonic chick myocytes.
甲基化修飾多肽
也叫甲基化標(biāo)記多肽,甲基化修飾是蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)的一種,幾乎參與細(xì)胞所有的生命活動(dòng)過(guò)程,發(fā)揮著重要的調(diào)控作用,蛋白質(zhì)在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下將甲基轉(zhuǎn)移至特定的氨基酸殘基上共價(jià)結(jié)合的過(guò)程。甲基化是一種可逆的修飾過(guò)程,由去甲基化酶催化去甲基化作用。
研究發(fā)現(xiàn),常見(jiàn)甲基化/去甲基化作用的氨基酸主要是賴(lài)氨酸(Lys)和精氨酸(Arg)研究表明,組蛋白賴(lài)氨酸甲基化修飾執(zhí)行著多種生物學(xué)功能,如干細(xì)胞的維持和分化、X染色體失活、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和DNA損傷反應(yīng)等,主要是影響染色質(zhì)濃縮,抑制基因表達(dá)。組蛋白精氨酸甲基化在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮著重要作用,并能影響細(xì)胞的多種生理過(guò)程,包括DNA修復(fù)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞發(fā)育及癌癥發(fā)生等因此專(zhuān)肽生物特地開(kāi)發(fā)甲基化修飾多肽技術(shù),為科學(xué)家在蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMS)的研究中提供幫助。
甲基化修飾(Me1,Me2,Me3)
采用高品質(zhì)的Fmoc-Lys(Me,Boc)-OH、 Fmoc-Lys(Me2)-OH、Fmoc-Lys(Me3)-OH.HCL、Fmoc-Arg(Me,Pbf)-OH 、Fmoc-Arg(me)2-OH.HCl(asymmetrical) 、Fmoc-Arg(me)2-OH.HCl(symmetrical) 等原料,采用Fmoc固相合成工藝合成,得到Lys甲基化,Arg甲基化標(biāo)記的多肽,使用HPLC 對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。最終產(chǎn)品提供相應(yīng)的質(zhì)譜圖,純度分析的HPLC 色譜圖。
Matsoukas JM, et, al. Differences in backbone structure between angiotensin II agonists and type I antagonists. J Med Chem. 1995 Nov 10;38(23):4660-9. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/7473593/
Aceto JF, et, al. [Sar1]angiotensin II receptor-mediated stimulation of protein synthesis in chick heart cells. Am J Physiol. 1990 Mar;258(3 Pt 2):H806-13. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/1690518/
Millan MA, et, al. Distribution of angiotensin II receptors in the brain of nonhuman primates. Peptides. Mar-Apr 1990;11(2):243-53. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2113279/
多肽H2N-Sar-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-COOH的合成步驟:
1、合成CTC樹(shù)脂:稱(chēng)取2.98g CTC Resin(如初始取代度約為0.65mmol/g)和2.32mmol Fmoc-Phe-OH于反應(yīng)器中,加入適量DCM溶解氨基酸(需要注意,此時(shí)CTC樹(shù)脂體積會(huì)增大好幾倍,避免DCM溶液過(guò)少),再加入5.81mmol DIPEA(Mw:129.1,d:0.740g/ml),反應(yīng)2-3小時(shí)后,可不抽濾溶液,直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇,封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次,甲醇洗滌1次,DCM洗滌一次,甲醇洗滌一次,DCM洗滌一次,DMF洗滌2次(這里使用甲醇和DCM交替洗滌,是為了更好地去除其他溶質(zhì),有利于后續(xù)反應(yīng))。得到 Fmoc-Phe-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下:
2、脫Fmoc:加3倍樹(shù)脂體積的20%Pip/DMF溶液,鼓氮?dú)?0分鐘,然后2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Phe-CTC Resin 。(此步驟脫除Fmoc基團(tuán),茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色,Pip為哌啶)。結(jié)構(gòu)圖如下:
3、縮合:取5.81mmol Fmoc-Pro-OH 氨基酸,加入到上述樹(shù)脂里,加適當(dāng)DMF溶解氨基酸,再依次加入11.62mmol DIPEA,5.52mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后,取小樣洗滌,茚三酮檢測(cè)為無(wú)色。用2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌3次樹(shù)脂。(洗滌樹(shù)脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備)。得到Fmoc-Pro-Phe-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:樹(shù)脂=3:6:2.85:1(摩爾比)。結(jié)構(gòu)圖如下:
4、依次循環(huán)步驟二、步驟三,依次得到
H2N-Pro-Phe-CTC Resin
Fmoc-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
H2N-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
Fmoc-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
H2N-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
Fmoc-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
H2N-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
H2N-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
Fmoc-Sar-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin
以上中間結(jié)構(gòu),均可在專(zhuān)肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中,一鍵畫(huà)出。
最后再經(jīng)過(guò)步驟二得到 H2N-Sar-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Phe-CTC Resin,結(jié)構(gòu)如下:
5、切割:6倍樹(shù)脂體積的切割液(或每1g樹(shù)脂加8ml左右的切割液),搖床搖晃 2小時(shí),過(guò)濾掉樹(shù)脂,用冰無(wú)水乙醚沉淀濾液,并用冰無(wú)水乙醚洗滌沉淀物3次,最后將沉淀物放真空干燥釜中,常溫干燥24小試,得到粗品H2N-Sar-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-COOH。結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。
切割液選擇:1)TFA:H2O=95%:5%、TFA:H2O=97.5%:2.5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前兩種適合沒(méi)有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。)
6、純化凍干:使用液相色譜純化,收集目標(biāo)峰液體,進(jìn)行凍干,獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過(guò)這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。
7、最后總結(jié):
杭州專(zhuān)肽生物技術(shù)有限公司(ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com)主營(yíng)定制多肽合成業(yè)務(wù),提供各類(lèi)長(zhǎng)肽,短肽,環(huán)肽,提供各類(lèi)修飾肽,如:熒光標(biāo)記修飾(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基團(tuán)修飾肽(疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素標(biāo)記肽(N15、C13),訂書(shū)肽(Stapled Peptide),脂肪酸修飾肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修飾肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),環(huán)肽(酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)),生物素標(biāo)記肽,PEG修飾肽,甲基化修飾肽
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