磷酸肽
在生命過程中發(fā)揮重要作用，磷酸化的位置在多肽上的Tyr、Ser，Thr，。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸，目前使用的都是單芐基磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法，但是目前采用該方法合成磷酸化多肽也有缺點，特別是在合成多磷酸化多肽或氨基酸較長的多肽的時候，連接效率低，最后產(chǎn)品純度很低，對于這種磷酸化多肽，我們考慮采用后磷酸化方法，其合成過程就是在多肽合成結束后，選擇性脫去要標記的氨基酸的側鏈保護基，對于Tyr，Thr可以直接使用側鏈不保護的氨基酸進行反應，而Ser可以采用Fmoc-Ser（trt），在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。
       后磷酸化，采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體，連接到羥基上，隨后在過氧酸下氧化生成磷?；瓿煞磻?。
 

目前，多肽的磷酸化修飾方法主要有兩種：

（1）將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中；

（2）多肽序列在樹脂上合成完后，再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化。
 

1）將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中：

即事先將需要磷酸化的氨基酸（Thr,Ser或Tyr）磷酸化并適當保護，然后按照正常SPPS 合成流程將磷酸化單體縮合到多肽指定位點。這種方法操作簡便，已經(jīng)成為多肽單位點 磷酸化修飾的主要方法。



 

2）多肽序列在樹脂上合成完后，再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化：

        采用將磷酸化單體縮合到多肽中的方法進行磷酸化修飾時，磷酸化的氨基酸由于側鏈修 飾的較大基團產(chǎn)生的位阻而導致難以與肽鏈縮合，并且之后的氨基酸引入都會比較困難， 尤其在含有多個磷酸化位點修飾時，合成將變得異常困難，并且最終產(chǎn)物成分復雜，難 以分離，產(chǎn)率極低。
        因此，當肽鏈中多個位點進行磷酸化時，可以考慮采用將多肽序列 在樹脂上合成完后，再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化：其合成過程主要 就是在多肽合成結束之后，選擇性的脫去要標記氨基酸的側鏈保護基，對于Tyr，Thr可 以直接使用側鏈不保護的氨基酸進行反應。

        側鏈保護基在1%TFA/DCM條件下可以定量的脫 除。采用這種方法時，可以采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體， 連接到羥基上，然后在過氧酸條件下氧化生成磷酰基，完成反應。