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Diacetyl-Lys-D-Ala-D-Ala (DALAA) is a substrate for penicillin-sensitive D-alanine carboxypeptidases (DD-carboxypeptidases).
編號:122552
CAS號:24570-39-6
單字母:Ac-K(Ac)-aa-OH
編號: | 122552 |
中文名稱: | N,N,Diacetyl-Lys-DAla-DAla |
英文名: | Ac2-Lys-DAla-DAla |
英文同義詞: | Ac?-Lys-D-Ala-D-Ala-OH, N,N,Diacetyl-Lys-DAla-DAla, Diacetyl-Lys-D-Ala-D-Ala-OH, DALAA |
CAS號: | 24570-39-6 |
單字母: | Ac-K(Ac)-aa-OH |
三字母: | Ac N端乙?;舛?/p> -Lys(Ac)側(cè)鏈乙?;馁嚢彼?/p> -DAlaD型丙氨酸 -DAlaD型丙氨酸 -OHC端羧基 |
氨基酸個(gè)數(shù): | 3 |
分子式: | C16H28O6N4 |
平均分子量: | 372.42 |
精確分子量: | 372.2 |
等電點(diǎn)(PI): | - |
pH=7.0時(shí)的凈電荷數(shù): | - |
平均親水性: | -0.5 |
疏水性值: | 1.8 |
外觀與性狀: | 白色粉末狀固體 |
消光系數(shù): | - |
來源: | 人工化學(xué)合成,僅限科學(xué)研究使用,不得用于人體。 |
純度: | 95%、98% |
鹽體系: | 可選TFA、HAc、HCl或其它 |
儲存條件: | 負(fù)80℃至負(fù)20℃ |
標(biāo)簽: | D型氨基酸肽 三肽 |
Diacetyl-Lys-D-Ala-D-Ala (DALAA) is a substrate for penicillin-sensitive D-alanine carboxypeptidases (DD-carboxypeptidases).
很多蛋白在細(xì)胞中非常容易被降解,或被標(biāo)記,進(jìn)而被選擇性地破壞。但含有部分D型氨基酸的多肽則顯示了很強(qiáng)的抵抗蛋白酶降解能力。
DOI | 名稱 | |
---|---|---|
10.1021/cc0498783 | Conformational studies of resin-bound vancomycin and the complex of vancomycin and Ac2-L-Lys-D-Ala-D-Ala | 下載 |
10.1002/chem.201102195 | Molecular interactions between glycopeptide vancomycin and bacterial cell wall peptide analogues | 下載 |
10.1016/j.chroma.2012.08.010 | Diastereoselective discrimination of lysine-alanine-alanine peptides by zwitterionic cinchona alkaloid-based chiral selectors using electrospray ionization mass spectrometry | 下載 |
10.1073/pnas.75.1.84 | Utilization of a depsipeptide substrate for trapping acyl-enzyme intermediates of penicillin-sensitive D-alanine carboxypeptidases | 下載 |
多肽Ac-Lys(Ac)-DAla-DAla-COOH的合成步驟:
1、合成CTC樹脂:稱取1.81g CTC Resin(如初始取代度約為0.41mmol/g)和0.89mmol Fmoc-DAla-OH于反應(yīng)器中,加入適量DCM溶解氨基酸(需要注意,此時(shí)CTC樹脂體積會增大好幾倍,避免DCM溶液過少),再加入2.23mmol DIPEA(Mw:129.1,d:0.740g/ml),反應(yīng)2-3小時(shí)后,可不抽濾溶液,直接加入1ml的HPLC級甲醇,封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次,甲醇洗滌1次,DCM洗滌一次,甲醇洗滌一次,DCM洗滌一次,DMF洗滌2次(這里使用甲醇和DCM交替洗滌,是為了更好地去除其他溶質(zhì),有利于后續(xù)反應(yīng))。得到 Fmoc-DAla-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下:
2、脫Fmoc:加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液,鼓氮?dú)?0分鐘,然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-DAla-CTC Resin 。(此步驟脫除Fmoc基團(tuán),茚三酮檢測為藍(lán)色,Pip為哌啶)。結(jié)構(gòu)圖如下:
3、縮合:取2.23mmol Fmoc-DAla-OH 氨基酸,加入到上述樹脂里,加適當(dāng)DMF溶解氨基酸,再依次加入4.45mmol DIPEA,2.11mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后,取小樣洗滌,茚三酮檢測為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。(洗滌樹脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備)。得到Fmoc-DAla-DAla-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:樹脂=3:6:2.85:1(摩爾比)。結(jié)構(gòu)圖如下:
4、依次循環(huán)步驟二、步驟三,依次得到
H2N-DAla-DAla-CTC Resin
Fmoc-Lys(Ac)-DAla-DAla-CTC Resin
以上中間結(jié)構(gòu),均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中,一鍵畫出。
最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Lys(Ac)-DAla-DAla-CTC Resin,結(jié)構(gòu)如下:
5、乙酸酐反應(yīng)連接:在上述樹脂中,加入適當(dāng)DMF后,再加入2.23mmol乙酸酐到樹脂中,再加入4.45mmol DIPEA,鼓氮?dú)夥磻?yīng)30分鐘。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂(洗滌樹脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備)。 得到Ac-Lys(Ac)-DAla-DAla-CTCResin。 結(jié)構(gòu)如下:
6、切割:6倍樹脂體積的切割液(或每1g樹脂加8ml左右的切割液),搖床搖晃 2小時(shí),過濾掉樹脂,用冰無水乙醚沉淀濾液,并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次,最后將沉淀物放真空干燥釜中,常溫干燥24小試,得到粗品Ac-Lys(Ac)-DAla-DAla-COOH。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。
切割液選擇:1)TFA:H2O=95%:5%、TFA:H2O=97.5%:2.5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。)
6、純化凍干:使用液相色譜純化,收集目標(biāo)峰液體,進(jìn)行凍干,獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時(shí)要取小樣復(fù)測下純度 是否目標(biāo)純度。
7、最后總結(jié):
杭州專肽生物技術(shù)有限公司(ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com)主營定制多肽合成業(yè)務(wù),提供各類長肽,短肽,環(huán)肽,提供各類修飾肽,如:熒光標(biāo)記修飾(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基團(tuán)修飾肽(疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素標(biāo)記肽(N15、C13),訂書肽(Stapled Peptide),脂肪酸修飾肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修飾肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),環(huán)肽(酰胺鍵環(huán)肽、一對或者多對二硫鍵環(huán)),生物素標(biāo)記肽,PEG修飾肽,甲基化修飾肽
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