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專注多肽 服務(wù)科研
胃蛋白酶的良好底物,也被組織蛋白酶 D 切割。
編號:142839
CAS號:50572-79-7
單字母:H2N-FGH-F(4NO2)-FAF-OMe
編號: | 142839 |
中文名稱: | Phe-Gly-His-Phe(NO2)-Phe-Ala-Phe-OMe |
CAS號: | 50572-79-7 |
單字母: | H2N-FGH-F(4NO2)-FAF-OMe |
三字母: | H2N N端氨基 -Phe苯丙氨酸 -Gly甘氨酸 -His組氨酸 -Phe(4NO2)對硝基苯丙氨酸 -Phe苯丙氨酸 -Ala丙氨酸 -Phe苯丙氨酸 -OMeC端甲酯化修飾 |
氨基酸個數(shù): | 7 |
分子式: | C48H54N10O10 |
平均分子量: | 931 |
精確分子量: | 930.4 |
等電點(PI): | - |
pH=7.0時的凈電荷數(shù): | 1.21 |
平均親水性: | -1.8333333333333 |
疏水性值: | 1.34 |
外觀與性狀: | 白色粉末狀固體 |
消光系數(shù): | - |
來源: | 人工化學(xué)合成,僅限科學(xué)研究使用,不得用于人體。 |
純度: | 95%、98% |
鹽體系: | 可選TFA、HAc、HCl或其它 |
儲存條件: | 負80℃至負20℃ |
標簽: | 側(cè)鏈保護基肽 |
A good substrate for pepsin which is also cleaved by cathepsin D.
DOI | 名稱 | |
---|---|---|
10.1111/j.1742-4658.2007.06136.x | Purification and characterization of pepsins A1 and A2 from the Antarctic rock cod Trematomus bernacchii | 下載 |
10.1073/pnas.68.2.257 | The comparative specificity of acid proteinases | 下載 |
10.1002/9780470122891.ch1 | The mechanism of the catalytic action of pepsin and related acid proteinases | 下載 |
10.1021/bi034516h | Coupled kinetics of ATP and peptide hydrolysis by Escherichia coli FtsH protease | 下載 |
多肽H2N-Phe-Gly-His-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-OMe的合成步驟:
1、合成CTC樹脂:稱取1.55g CTC Resin(如初始取代度約為0.32mmol/g)和0.6mmol Fmoc-Phe-OH于反應(yīng)器中,加入適量DCM溶解氨基酸(需要注意,此時CTC樹脂體積會增大好幾倍,避免DCM溶液過少),再加入1.49mmol DIPEA(Mw:129.1,d:0.740g/ml),反應(yīng)2-3小時后,可不抽濾溶液,直接加入1ml的HPLC級甲醇,封端半小時。依次用DMF洗滌2次,甲醇洗滌1次,DCM洗滌一次,甲醇洗滌一次,DCM洗滌一次,DMF洗滌2次(這里使用甲醇和DCM交替洗滌,是為了更好地去除其他溶質(zhì),有利于后續(xù)反應(yīng))。得到 Fmoc-Phe-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下:
2、脫Fmoc:加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液,鼓氮氣30分鐘,然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Phe-CTC Resin 。(此步驟脫除Fmoc基團,茚三酮檢測為藍色,Pip為哌啶)。結(jié)構(gòu)圖如下:
3、縮合:取1.49mmol Fmoc-Ala-OH 氨基酸,加入到上述樹脂里,加適當DMF溶解氨基酸,再依次加入2.98mmol DIPEA,1.41mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后,取小樣洗滌,茚三酮檢測為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。(洗滌樹脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準備)。得到Fmoc-Ala-Phe-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:樹脂=3:6:2.85:1(摩爾比)。結(jié)構(gòu)圖如下:
4、依次循環(huán)步驟二、步驟三,依次得到
H2N-Ala-Phe-CTC Resin
Fmoc-Phe-Ala-Phe-CTC Resin
H2N-Phe-Ala-Phe-CTC Resin
Fmoc-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin
H2N-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin
Fmoc-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin
H2N-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin
Fmoc-Gly-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin
H2N-Gly-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin
Fmoc-Phe-Gly-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin
以上中間結(jié)構(gòu),均可在專肽生物多肽計算器-多肽結(jié)構(gòu)計算器中,一鍵畫出。
最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Phe-Gly-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin,結(jié)構(gòu)如下:
5、N端臨時Boc保護:加適當DMF到樹脂中,再依次加入5.95mmol DIPEA,2.98mmol Boc酸酐溶液,鼓氮氣反應(yīng)30分鐘。取小樣茚三酮檢測為無色。Boc酸酐:DIPEA:樹脂=6:12:1(摩爾比)。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂(洗滌樹脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準備)。 得到 Boc-Phe-Gly-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin。結(jié)構(gòu)如下:
6、全保護切割:配置0.5%TFA/DCM溶液,溶液體積約為樹脂體積的3倍。再次用DCM洗滌樹脂2遍(去除殘留DMF),后將配置好的溶液倒入到反應(yīng)器中,反應(yīng)30分鐘。抽濾樹脂,收集濾液(此時多肽已經(jīng)從樹脂上分離,存在于濾液中)。多肽序列為 Boc-Phe-Gly-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-CTC Resin。 在濾液中添加DIEPA,調(diào)PH至7-8。用飽和NaHCO3洗滌濾液,分離出DCM層溶液??蛇m當旋蒸DCM層溶液,減少有機溶劑。再次加入1或2倍體積的乙酸乙酯,用稀HCl溶液調(diào)PH至微酸性,將多肽從DCM層萃取到乙酸乙酯層。用飽和NaCl洗滌2次乙酸乙酯層。用無水硫酸鎂吸收乙酸乙酯層的水分。通過減壓旋蒸,直接將乙酸乙酯完全旋蒸掉,得到晶體狀固體多肽,用于下一步C端反應(yīng)?;蛲ㄟ^減壓旋蒸保留適量乙酸乙酯的溶液體積,加入冰乙醚析出 多肽,然后對多肽進行烘干操作即可用于下一步C端反應(yīng)。Boc-Phe-Gly-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-COOH的結(jié)構(gòu)圖如下。
7、甲醇反應(yīng)連接:在上述樹脂中,加入適當DMF后,再加入1.49mmol 甲醇到樹脂中,再加入2.98mmol DIPEA、1.41mmol HBTU,鼓氮氣反應(yīng)30分鐘。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂(洗滌樹脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準備)。 得到 Boc-Phe-Gly-His(Trt)-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-OMe。 結(jié)構(gòu)如下:
8、切割:6倍樹脂體積的切割液(或每1g樹脂加8ml左右的切割液),搖床搖晃 2小時,過濾掉樹脂,用冰無水乙醚沉淀濾液,并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次,最后將沉淀物放真空干燥釜中,常溫干燥24小試,得到粗品H2N-Phe-Gly-His-Phe(4NO2)-Phe-Ala-Phe-OMe。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。
切割液選擇:1)TFA:H2O=95%:5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。)
9、純化凍干:使用液相色譜純化,收集目標峰液體,進行凍干,獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復(fù)測下純度 是否目標純度。
10、最后總結(jié):
杭州專肽生物技術(shù)有限公司(ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com)主營定制多肽合成業(yè)務(wù),提供各類長肽,短肽,環(huán)肽,提供各類修飾肽,如:熒光標記修飾(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基團修飾肽(疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素標記肽(N15、C13),訂書肽(Stapled Peptide),脂肪酸修飾肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修飾肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),環(huán)肽(酰胺鍵環(huán)肽、一對或者多對二硫鍵環(huán)),生物素標記肽,PEG修飾肽,甲基化修飾肽等。
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