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多肽產(chǎn)品

70968-04-6,胰腺彈性蛋白酶底物、Pancreatic elastase substrate,Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA,Suc-AAPL-pNA,杭州專肽生物的產(chǎn)品

胰腺彈性蛋白酶底物、Pancreatic elastase substrate

Suc-AAPL-pNA, a sensitive substrate for human and especially porcine pancreatic elastases. Substrate for leucine endopeptidase from the psychrotropic bacillus B. cereus.

編號：129910

CAS號：70968-04-6

單字母：Suc-AAPL-pNA

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基本屬性產(chǎn)品描述文獻(xiàn)鏈接合成路線相關(guān)產(chǎn)品
  • 編號:129910
    中文名稱:胰腺彈性蛋白酶底物、Pancreatic elastase substrate
    英文名:Pancreatic elastase substrate
    CAS號:70968-04-6
    單字母:Suc-AAPL-pNA
    三字母:Suc

    N端丁二酸修飾

    -Ala

    丙氨酸

    -Ala

    丙氨酸

    -Pro

    脯氨酸

    -Leu

    亮氨酸

    -pNA

    對硝基苯胺

    氨基酸個數(shù):4
    分子式:C27H38O9N6
    平均分子量:590.63
    精確分子量:590.27
    等電點(diǎn)(PI):-
    pH=7.0時的凈電荷數(shù):-
    平均親水性:-0.93333333333333
    疏水性值:1.45
    外觀與性狀:白色粉末狀固體
    消光系數(shù):-
    來源:人工化學(xué)合成，僅限科學(xué)研究使用，不得用于人體。
    純度:95%、98%
    鹽體系:可選TFA、HAc、HCl或其它
    儲存條件:負(fù)80℃至負(fù)20℃
    標(biāo)簽:pNA修飾肽    Suc修飾肽   

  • Suc-AAPL-pNA, a sensitive substrate for human and especially porcine pancreatic elastases. Substrate for leucine endopeptidase from the psychrotropic bacillus B. cereus.

  • DOI名稱
    10.1074/jbc.M411482200Granzyme M is a regulatory protease that inactivates proteinase inhibitor 9, an endogenous inhibitor of granzyme B下載
    10.1016/s0014-5793(01)03053-8Functional analysis of the propeptides of subtilisin E and aqualysin I as intramolecular chaperones下載
    10.1016/s0014-5793(02)02242-1Evidence for diversity of substrate specificity among members of the chymase family of serine proteases下載
    10.1046/j.1432-1033.2003.03368.xProperties of purified gut trypsin from Helicoverpa zea, adapted to proteinase inhibitors下載
    10.1074/jbc.M301512200Extended substrate specificity of rat mast cell protease 5, a rodent alpha-chymase with elastase-like primary specificity下載
    10.1016/j.febslet.2005.08.056Differences between human proteinase 3 and neutrophil elastase and their murine homologues are relevant for murine model experiments下載
    10.1016/j.febslet.2006.01.022One of the three proteinase inhibitor genes newly identified in the Brassica napus genome codes for an inhibitor of glutamyl endopeptidase下載
    10.1515/znc-2006-5-623Catalytic efficiencies of alkaline proteinases from microorganisms下載
    10.1016/j.jinsphys.2007.02.019Proteinase, amylase, and proteinase-inhibitor activities in the gut of six cockroach species下載
    10.1074/jbc.M803041200Activation mechanism of recombinant Der p 3 allergen zymogen: contribution of cysteine protease Der p 1 and effect of propeptide glycosylation下載
    10.1016/j.bcp.2010.06.014Potency variation of small-molecule chymase inhibitors across species下載
    10.1016/j.bbrc.2010.08.078Cleavage of peptide bonds bearing ionizable amino acids at P(1) by serine proteases with hydrophobic S(1) pocket下載
    10.1002/bip.22184Hybrid analogues of SFTI-1 modified in P? position by β- and γ-amino acids and N-substituted β-alanines下載
    10.1016/j.fob.2012.07.001The role of substrate specificity and metal binding in defining the activity and structure of an intracellular subtilisin下載
    10.1111/febs.12542Investigation of peptide splicing using two-peptide-chain analogs of trypsin inhibitor SFTI-1下載
    10.1016/j.bbagen.2013.11.017Der p 1 is the primary activator of Der p 3, Der p 6 and Der p 9 the proteolytic allergens produced by the house dust mite Dermatophagoides pteronyssinus下載
    10.3390/toxins6092719Biochemical characterization of the SPATE members EspPα and EspI下載
    10.1371/journal.pone.0111363Structural and functional characterization of cleavage and inactivation of human serine protease inhibitors by the bacterial SPATE protease EspPα from enterohemorrhagic E. coli下載
    10.1021/bi00544a011Substrate specificity of human pancreatic elastase 2下載
    10.3791/52911A High Yield and Cost-efficient Expression System of Human Granzymes in Mammalian Cells下載

  • 多肽Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA的合成步驟：

    1、合成CTC樹脂：稱取0.39g CTC Resin（如初始取代度約為0.9mmol/g）和0.42mmol Fmoc-Leu-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時CTC樹脂體積會增大好幾倍，避免DCM溶液過少），再加入1.05mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反應(yīng)2-3小時后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級甲醇，封端半小時。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次（這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng)）。得到  Fmoc-Leu-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下：

    2、脫Fmoc：加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Leu-CTC Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

    3、縮合：取1.05mmol Fmoc-Pro-OH 氨基酸，加入到上述樹脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入2.11mmol DIPEA，1.0mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Pro-Leu-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

    4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

    H2N-Pro-Leu-CTC Resin

    Fmoc-Ala-Pro-Leu-CTC Resin

    H2N-Ala-Pro-Leu-CTC Resin

    Fmoc-Ala-Ala-Pro-Leu-CTC Resin

    以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫出。

    最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Ala-Ala-Pro-Leu-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如下：

    5、丁二酸反應(yīng)連接：在上述樹脂中，加入適當(dāng)DMF后，再加入1.05mmol丁二酸到樹脂中，再加入2.11mmol DIPEA，鼓氮?dú)夥磻?yīng)30分鐘。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。 得到Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-CTC Resin。 結(jié)構(gòu)如下：

    6、全保護(hù)切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液體積約為樹脂體積的3倍。再次用DCM洗滌樹脂2遍（去除殘留DMF），后將配置好的溶液倒入到反應(yīng)器中，反應(yīng)30分鐘。抽濾樹脂，收集濾液（此時多肽已經(jīng)從樹脂上分離，存在于濾液中）。多肽序列為 Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-CTC Resin。 在濾液中添加DIEPA，調(diào)PH至7-8。用飽和NaHCO3洗滌濾液，分離出DCM層溶液?？蛇m當(dāng)旋蒸DCM層溶液，減少有機(jī)溶劑。再次加入1或2倍體積的乙酸乙酯，用稀HCl溶液調(diào)PH至微酸性，將多肽從DCM層萃取到乙酸乙酯層。用飽和NaCl洗滌2次乙酸乙酯層。用無水硫酸鎂吸收乙酸乙酯層的水分。通過減壓旋蒸，直接將乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶體狀固體多肽，用于下一步C端反應(yīng)?；蛲ㄟ^減壓旋蒸保留適量乙酸乙酯的溶液體積，加入冰乙醚析出 多肽，然后對多肽進(jìn)行烘干操作即可用于下一步C端反應(yīng)。Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-COOH的結(jié)構(gòu)圖如下。

    7、4-硝基苯胺反應(yīng)連接：在上述樹脂中，加入適當(dāng)DMF后，再加入1.05mmol 4-硝基苯胺到樹脂中，再加入2.11mmol DIPEA、1.0mmol HBTU，鼓氮?dú)夥磻?yīng)30分鐘。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。 得到 Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA。 結(jié)構(gòu)如下：

    8、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

    切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%

    2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

    3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

    （前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

    9、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復(fù)測下純度 是否目標(biāo)純度。

    10、最后總結(jié)：

    杭州專肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com）主營定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類長肽，短肽，環(huán)肽，提供各類修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對或者多對二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽等。

    以上所有內(nèi)容，為專肽生物原創(chuàng)內(nèi)容，請勿發(fā)布到其他網(wǎng)站上。

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