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多肽產(chǎn)品

128802-78-8,肽基脯氨酰異構(gòu)酶底物：Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-對(duì)硝基苯胺,Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-pNA,Suc-ALPF-pNA,杭州專肽生物的產(chǎn)品

肽基脯氨酰異構(gòu)酶底物：Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-對(duì)硝基苯胺

Substrate for FK-506 binding proteins (FKBPs, also called macrophilins) and cyclophilins, which belong to the group of peptidyl prolyl cis-trans isomerases (PPIases). Suc-ALPF-pNA,has been used for an uncoupled protease-free assay of PPIase activity.

編號(hào)：198506

CAS號(hào)：128802-78-8

單字母：Suc-ALPF-pNA

糾錯(cuò)
基本屬性產(chǎn)品描述文獻(xiàn)鏈接合成路線相關(guān)產(chǎn)品
  • 編號(hào):198506
    中文名稱:肽基脯氨酰異構(gòu)酶底物：Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-對(duì)硝基苯胺
    CAS號(hào):128802-78-8
    單字母:Suc-ALPF-pNA
    三字母:Suc

    N端丁二酸修飾

    -Ala

    丙氨酸：alanine。L-丙氨酸的系統(tǒng)命名為(2S)-氨基丙酸，是編碼氨基酸，也叫L-α-丙氨酸。符號(hào)：A，Ala。D-丙氨酸存在于多種細(xì)菌細(xì)胞壁的糖肽中。β-丙氨酸是維生素泛酸和輔酶A的組分。

    -Leu

    L-亮氨酸：leucine。系統(tǒng)命名為(2S)-氨基-4-甲基戊酸。是編碼氨基酸。是哺乳動(dòng)物的必需氨基酸。符號(hào)：L，Leu。

    -Pro

    L-脯氨酸：proline。系統(tǒng)命名為吡咯烷-(2S)-羧酸。為亞氨基酸。是編碼氨基酸。在肽鏈中有特殊作用，如易形成順式的肽鍵等。符號(hào)：P，Pro。

    -Phe

    L-苯丙氨酸：phenylalanine。系統(tǒng)命名為(2S)-氨基-3-苯基丙酸。是編碼氨基酸。是哺乳動(dòng)物的必需氨基酸。符號(hào)：F，Phe。

    -pNA

    對(duì)硝基苯胺

    氨基酸個(gè)數(shù):4
    分子式:C33H42O9N6
    平均分子量:666.72
    精確分子量:666.3
    等電點(diǎn)(PI):-
    pH=7.0時(shí)的凈電荷數(shù):-
    平均親水性:-1.6
    疏水性值:1.7
    外觀與性狀:白色粉末狀固體
    消光系數(shù):-
    來源:人工化學(xué)合成，僅限科學(xué)研究使用，不得用于人體。
    純度:95%、98%
    鹽體系:可選TFA、HAc、HCl或其它
    儲(chǔ)存條件:負(fù)80℃至負(fù)20℃
    標(biāo)簽:pNA修飾肽    Suc修飾肽   

  • Substrate for FK-506 binding proteins (FKBPs, also called macrophilins) and cyclophilins, which belong to the group of peptidyl prolyl cis-trans isomerases (PPIases). Suc-ALPF-pNA,has been used for an uncoupled protease-free assay of PPIase activity.

  • DOI名稱
    10.1016/j.febslet.2006.04.087Comparative analysis of enzyme activities and mRNA levels of peptidyl prolyl cis/trans isomerases in various organs of wild type and Pin1-/- mice下載
    10.1021/jm020865iSynthesis and evaluation of Glypsi(PO(2)R-N)Pro-containing pseudopeptides as novel inhibitors of the human cyclophilin hCyp-18下載
    10.1073/pnas.89.16.7471Yeast FKBP-13 is a membrane-associated FK506-binding protein encoded by the nonessential gene FKB2下載
    10.1016/j.molbiopara.2004.10.007A Plasmodium falciparum FK506-binding protein (FKBP) with peptidyl-prolyl cis-trans isomerase and chaperone activities下載
    10.1074/jbc.M500990200A novel class of dual-family immunophilins下載
    10.1016/j.cell.2005.07.010The FK506 binding protein Fpr3 counteracts protein phosphatase 1 to maintain meiotic recombination checkpoint activity下載
    10.1515/znc-2006-5-623Catalytic efficiencies of alkaline proteinases from microorganisms下載
    10.1210/me.2006-0547FK506-binding protein 52 phosphorylation: a potential mechanism for regulating steroid hormone receptor activity下載
    10.1523/JNEUROSCI.4815-09.2010The Hsp90 cochaperone, FKBP51, increases Tau stability and polymerizes microtubules下載
    10.1016/j.bbamcr.2010.05.006Identification of an atypical peptidyl-prolyl cis/trans isomerase from trypanosomatids下載
    10.1021/bi00239a007Determination of kinetic constants for peptidyl prolyl cis-trans isomerases by an improved spectrophotometric assay下載
    10.1016/j.bcp.2010.06.014Potency variation of small-molecule chymase inhibitors across species下載
    10.1006/abio.1997.2330A protease-free assay for peptidyl prolyl cis/trans isomerases using standard peptide substrates下載

  • 多肽Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-pNA的合成步驟：

    1、合成CTC樹脂：稱取2.41g CTC Resin（如初始取代度約為1.15mmol/g）和3.33mmol Fmoc-Phe-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時(shí)CTC樹脂體積會(huì)增大好幾倍，避免DCM溶液過少），再加入8.31mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反應(yīng)2-3小時(shí)后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇，封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次（這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng)）。得到  Fmoc-Phe-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下：

    2、脫Fmoc：加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Phe-CTC Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

    3、縮合：取8.31mmol Fmoc-Pro-OH 氨基酸，加入到上述樹脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入16.63mmol DIPEA，7.9mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測(cè)為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Pro-Phe-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

    4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

    H2N-Pro-Phe-CTC Resin

    Fmoc-Leu-Pro-Phe-CTC Resin

    H2N-Leu-Pro-Phe-CTC Resin

    Fmoc-Ala-Leu-Pro-Phe-CTC Resin

    以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫出。

    最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Ala-Leu-Pro-Phe-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如下：

    5、丁二酸反應(yīng)連接：在上述樹脂中，加入適當(dāng)DMF后，再加入8.31mmol丁二酸到樹脂中，再加入16.63mmol DIPEA，鼓氮?dú)夥磻?yīng)30分鐘。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。 得到Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-CTC Resin。 結(jié)構(gòu)如下：

    6、全保護(hù)切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液體積約為樹脂體積的3倍。再次用DCM洗滌樹脂2遍（去除殘留DMF），后將配置好的溶液倒入到反應(yīng)器中，反應(yīng)30分鐘。抽濾樹脂，收集濾液（此時(shí)多肽已經(jīng)從樹脂上分離，存在于濾液中）。多肽序列為 Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-CTC Resin。 在濾液中添加DIEPA，調(diào)PH至7-8。用飽和NaHCO3洗滌濾液，分離出DCM層溶液。可適當(dāng)旋蒸DCM層溶液，減少有機(jī)溶劑。再次加入1或2倍體積的乙酸乙酯，用稀HCl溶液調(diào)PH至微酸性，將多肽從DCM層萃取到乙酸乙酯層。用飽和NaCl洗滌2次乙酸乙酯層。用無水硫酸鎂吸收乙酸乙酯層的水分。通過減壓旋蒸，直接將乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶體狀固體多肽，用于下一步C端反應(yīng)。或通過減壓旋蒸保留適量乙酸乙酯的溶液體積，加入冰乙醚析出 多肽，然后對(duì)多肽進(jìn)行烘干操作即可用于下一步C端反應(yīng)。Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-COOH的結(jié)構(gòu)圖如下。

    7、4-硝基苯胺反應(yīng)連接：在上述樹脂中，加入適當(dāng)DMF后，再加入8.31mmol 4-硝基苯胺到樹脂中，再加入16.63mmol DIPEA、7.9mmol HBTU，鼓氮?dú)夥磻?yīng)30分鐘。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。 得到 Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-pNA。 結(jié)構(gòu)如下：

    8、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-pNA。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

    切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%

    2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

    3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

    （前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

    9、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。

    10、最后總結(jié)：

    杭州專肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com）主營(yíng)定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類長(zhǎng)肽，短肽，環(huán)肽，提供各類修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽等。

    以上所有內(nèi)容，為專肽生物原創(chuàng)內(nèi)容，請(qǐng)勿發(fā)布到其他網(wǎng)站上。

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