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多肽產(chǎn)品

1209500-46-8,GsMTx4,H2N-Gly-Cys-Leu-Glu-Phe-Trp-Trp-Lys-Cys-Asn-Pro-Asn-Asp-Asp-Lys-Cys-Cys-Arg-Pro-Lys-Leu-Lys-Cys-Ser-Lys-Leu-Phe-Lys-Leu-Cys-Asn-Phe-Ser-Phe-NH2,H2N-GCLEFWWKCNPNDDKCCRPKLKCSKLFKLCNFSF-NH2,杭州專肽生物的產(chǎn)品

狼蛛毒液多肽、GsMTx4

一種蜘蛛毒液肽,選擇性地抑制屬于 Piezo 和 TRP 通道家族的陽離子可滲透的機(jī)械敏感性通道(MSCs)。

編號(hào):200464

CAS號(hào):1209500-46-8

單字母:H2N-GCLEFWWKCNPNDDKCCRPKLKCSKLFKLCNFSF-CONH2(Disulfide Bridge:C2-C17 & C9-C23 & C16-C30)

糾錯(cuò)
  • 編號(hào):200464
    中文名稱:狼蛛毒液多肽、GsMTx4
    英文名:GsMTx4
    CAS號(hào):1209500-46-8
    單字母:H2N-GCLEFWWKCNPNDDKCCRPKLKCSKLFKLCNFSF-CONH2(Disulfide Bridge:C2-C17 & C9-C23 & C16-C30)
    三字母:H2N-Gly-Cys-Leu-Glu-Phe-Trp-Trp-Lys-Cys-Asn-Pro-Asn-Asp-Asp-Lys-Cys-Cys-Arg-Pro-Lys-Leu-Lys-Cys-Ser-Lys-Leu-Phe-Lys-Leu-Cys-Asn-Phe-Ser-Phe-CONH2(Disulfide Bridge:Cys2-Cys17 & Cys9-Cys23 & Cys16-Cys30)
    氨基酸個(gè)數(shù):34
    分子式:C185H273N49O45S6
    平均分子量:4095.84
    精確分子量:4092.89
    等電點(diǎn)(PI):11.1
    pH=7.0時(shí)的凈電荷數(shù):10.79
    平均親水性:0.038709677419355
    疏水性值:-0.43
    消光系數(shù):11000
    來源:人工化學(xué)合成,僅限科學(xué)研究使用,不得用于人體。
    儲(chǔ)存條件:負(fù)80℃至負(fù)20℃
    標(biāo)簽:二硫鍵環(huán)肽   

    生物活性:GsMTx4是一種選擇性抑制Piezo和TRP通道家族陽離子滲透性機(jī)械敏感通道(MSCs)的蜘蛛毒液肽。GsMTx4明顯減弱膀胱過度活躍。
  • GsMTx4 是一種蜘蛛毒液肽,選擇性地抑制屬于 Piezo 和 TRP 通道家族的陽離子可滲透的機(jī)械敏感性通道(MSCs)。GsMTx4 是一種重要的藥理學(xué)工具,用于鑒定興奮性 MSCs 在正常生理學(xué)和病理學(xué)中的作用。GsMTx4 顯著減弱膀胱機(jī)能亢進(jìn)。

    GsMTx4 is a spider venom peptide that selectively inhibits cation-permeable mechanosensitive channels (MSCs) belonging to the Piezo and TRP channel families. GsMTx4 is an important pharmacological tool for identifying the role of these excitatory MSCs in normal physiology and pathology. GsMTx4 significantly attenuates bladder hyperactivity.

    GsMTx4是一種從狼蛛毒液中分離出的多肽,同時(shí)也是選擇性的Piezo和TRP通道家族的機(jī)械敏感通道(MSCs)的抑制劑。

    二硫鍵廣泛存在與蛋白結(jié)構(gòu)中,對(duì)穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)具有非常重要的意義,二硫鍵一般是通過序列中的2個(gè)Cys的巰基,經(jīng)氧化形成。
     

    形成二硫鍵的方法很多:空氣氧化法,DMSO氧化法,過氧化氫氧化法等。
     

    二硫鍵的合成過程,  可以通過Ellman檢測(cè)以及HPLC檢測(cè)方法對(duì)其反應(yīng)進(jìn)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)。  
       

    如果多肽中只含有1對(duì)Cys,那二硫鍵的形成是簡(jiǎn)單的。多肽經(jīng)固相或液相合成,然后在pH8-9的溶液中進(jìn)行氧化。      
     

    當(dāng)需要形成2對(duì)或2對(duì)以上的二硫鍵時(shí),合成過程則相對(duì)復(fù)雜。盡管二硫鍵的形成通常是在合成方案的最后階段完成,但有時(shí)引入預(yù)先形成的二硫化物是有利于連合或延長(zhǎng)肽鏈的。通常采用的巰基保護(hù)基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多種基團(tuán)。我們分別列出兩種以2-Cl樹脂和Rink樹脂為載體合成的多肽上多對(duì)二硫鍵形成路線:
     

    二硫鍵反應(yīng)條件選擇    
     

     二硫鍵即為蛋白質(zhì)或多肽分子中兩個(gè)不同位點(diǎn)Cys的巰基(-SH)被氧化形成的S-S共價(jià)鍵。 一條肽鏈上不同位置的氨基酸之間形成的二硫鍵,可以將肽鏈折疊成特定的空間結(jié)構(gòu)。多肽分 子通常分子量較大,空間結(jié)構(gòu)復(fù)雜,結(jié)構(gòu)中形成二硫鍵時(shí)要求兩個(gè)半胱氨酸在空間距離上接近。 此外,多肽結(jié)構(gòu)中還原態(tài)的巰基化學(xué)性質(zhì)活潑,容易發(fā)生其他的副反應(yīng),而且肽鏈上其他側(cè)鏈 也可能會(huì)發(fā)生一系列修飾,因此,肽鏈進(jìn)行修飾所選取的氧化劑和氧化條件是反應(yīng)的關(guān)鍵因素, 反應(yīng)機(jī)理也比較復(fù)雜,既可能是自由基反應(yīng),也可能是離子反應(yīng)。      

    反應(yīng)條件有多種選擇,比如空氣氧化,DMSO氧化等溫和的氧化過程,也可以采用H2O2,I2, 汞鹽等激烈的反應(yīng)條件。
     

    空氣氧化法: 空氣氧化法形成二硫鍵是多肽合成中最經(jīng)典的方法,通常是將巰基處于還原態(tài)的多肽溶于水中,在近中性或弱堿性條件下(PH值6.5-10),反應(yīng)24小時(shí)以上。為了降低分子之間二硫鍵形成的可能,該方法通常需要在低濃度條件下進(jìn)行。
     

    碘氧化法:將多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中,逐滴滴加10-15mol/L的碘進(jìn)行氧化,反應(yīng)15-40min。當(dāng)肽鏈中含有對(duì)碘比較敏感的Tyr、Trp、Met和His的殘基時(shí),氧化條件要控制的更精確,氧化完后,立即加入維生素C或硫代硫酸鈉除去過量的碘。 當(dāng)序列中有兩對(duì)或多對(duì)二硫鍵需要成環(huán)時(shí),通常有兩種情況:
     

    自然隨機(jī)成環(huán):       序列中的Cys之間隨機(jī)成環(huán),與一對(duì)二硫鍵成環(huán)條件相似;
     

    定點(diǎn)成環(huán):       定點(diǎn)成環(huán)即序列中的Cys按照設(shè)計(jì)要求形成二硫鍵,反應(yīng)過程相對(duì)復(fù)雜。在 固相合成多肽之前,需要提前設(shè)計(jì)幾對(duì)二硫鍵形成的順序和方法路線,選擇不同的側(cè)鏈 巰基保護(hù)基,利用其性質(zhì)差異,分步氧化形成兩對(duì)或多對(duì)二硫鍵。       通常采用的巰基保護(hù) 基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多種基團(tuán)。

  • DOI名稱
    10.1016/j.bpj.2016.11.013GsMTx4: Mechanism of Inhibiting Mechanosensitive Ion Channels下載
    10.1038/s12276-018-0088-zIncreased Piezo1 channel activity in interstitial Cajal-like cells induces bladder hyperactivity by functionally interacting with NCX1 in rats with cyclophosphamide-induced cystitis下載
  • 多肽H2N-Gly-Cys-Leu-Glu-Phe-Trp-Trp-Lys-Cys-Asn-Pro-Asn-Asp-Asp-Lys-Cys-Cys-Arg-Pro-Lys-Leu-Lys-Cys-Ser-Lys-Leu-Phe-Lys-Leu-Cys-Asn-Phe-Ser-Phe-NH2的合成步驟:

    1、合成MBHA樹脂:取若干克的MBHA樹脂(如初始取代度為0.5mmol/g)和1倍樹脂摩爾量的Fmoc-Linker-OH加入到反應(yīng)器中,加入DMF,攪拌使氨基酸完全溶解。再加入樹脂2倍量的DIEPA,攪拌混合均勻。再加入樹脂0.95倍量的HBTU,攪拌混合均勻。反應(yīng)3-4小時(shí)后,用DMF洗滌3次。用2倍樹脂體積的10%乙酸酐/DMF 進(jìn)行封端30分鐘。然后再用DMF洗滌3次,甲醇洗滌2次,DCM洗滌2次,再用甲醇洗滌2次。真空干燥12小時(shí)以上,得到干燥的樹脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin},測(cè)定取代度。這里測(cè)得取代度為 0.3mmol/g。結(jié)構(gòu)如下圖:

    2、脫Fmoc:取2.14g的上述樹脂,用DCM或DMF溶脹20分鐘。用DMF洗滌2遍。加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液,鼓氮?dú)?0分鐘,然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。(此步驟脫除Fmoc基團(tuán),茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色,Pip為哌啶)。結(jié)構(gòu)圖如下:

    3、縮合:取1.93mmol Fmoc-Phe-OH 氨基酸,加入到上述樹脂里,加適當(dāng)DMF溶解氨基酸,再依次加入3.85mmol DIPEA,1.83mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后,取小樣洗滌,茚三酮檢測(cè)為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。(洗滌樹脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備)。得到Fmoc-Phe-Linker-MBHA Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:樹脂=3:6:2.85:1(摩爾比)。結(jié)構(gòu)圖如下:

    4、依次循環(huán)步驟二、步驟三,依次得到

    H2N-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

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    H2N-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

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    Fmoc-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

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    Fmoc-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

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    Fmoc-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

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    H2N-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

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    Fmoc-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Glu(OtBu)-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Glu(OtBu)-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Leu-Glu(OtBu)-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Leu-Glu(OtBu)-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Cys(Trt)-Leu-Glu(OtBu)-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    H2N-Cys(Trt)-Leu-Glu(OtBu)-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Leu-Glu(OtBu)-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin

    以上中間結(jié)構(gòu),均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中,一鍵畫出。

    最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Gly-Cys(Trt)-Leu-Glu(OtBu)-Phe-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Phe-Lys(Boc)-Leu-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Ser(tBu)-Phe-Linker-MBHA Resin,結(jié)構(gòu)如下:

    5、切割:6倍樹脂體積的切割液(或每1g樹脂加8ml左右的切割液),搖床搖晃 2小時(shí),過濾掉樹脂,用冰無水乙醚沉淀濾液,并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次,最后將沉淀物放真空干燥釜中,常溫干燥24小試,得到粗品H2N-Gly-Cys-Leu-Glu-Phe-Trp-Trp-Lys-Cys-Asn-Pro-Asn-Asp-Asp-Lys-Cys-Cys-Arg-Pro-Lys-Leu-Lys-Cys-Ser-Lys-Leu-Phe-Lys-Leu-Cys-Asn-Phe-Ser-Phe-NH2。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

    切割液選擇:1)TFA:H2O=95%:5%

    2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%

    3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%

    (前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。)

    6、純化凍干:使用液相色譜純化,收集目標(biāo)峰液體,進(jìn)行凍干,獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。

    7、最后總結(jié):

    杭州專肽生物技術(shù)有限公司(ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com)主營(yíng)定制多肽合成業(yè)務(wù),提供各類長(zhǎng)肽,短肽,環(huán)肽,提供各類修飾肽,如:熒光標(biāo)記修飾(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基團(tuán)修飾肽(疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素標(biāo)記肽(N15、C13),訂書肽(Stapled Peptide),脂肪酸修飾肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修飾肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),環(huán)肽(酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)),生物素標(biāo)記肽,PEG修飾肽,甲基化修飾肽等。

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