Biotin-β-Amyloid (17-40) 是一種 N 端標(biāo)記的生物素化淀粉樣蛋白 β-Amyloid (17-40) 肽。β-Amyloid (17-40) 是 Aβ 蛋白的 24 個(gè)殘基片段，由淀粉樣前體蛋白 (APP) 的翻譯加工后而成。
Biotin-β-Amyloid (17-40) is a N-terminal-labelled biotinylated amyloid-ß-(1-40) peptide. β-Amyloid (17-40) is a 24-residue fragment of the Aβ protein via post-translational processing of amyloid precursor protein (APP)[1].

專肽生物合成用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究的生物素化肽。盡管生物素可以在 N 端或 C 端引入（通過(guò)賴氨酸殘基），但我們建議使用 N 端修飾，因?yàn)樗杀镜?、成功率高、周轉(zhuǎn)時(shí)間短且易于操作。因?yàn)槎嚯暮铣墒菑?C 端到 N 端合成的，因此，N 端修飾是 SPPS步驟的最后一步，不需要額外的特定縮合步驟。相比之下，C 端修飾需要額外的步驟，并且通常更復(fù)雜。當(dāng)然，原則上生物素可以定位在任何地方。

生物素可以通過(guò)多種不同的接頭或間隔物與肽分離。盡管如此，還是建議包含一個(gè)靈活的間隔物，例如 Ahx（一個(gè) 6 碳接頭），以使生物素標(biāo)簽更加穩(wěn)定或靈活。

專肽生物在 N 端或 C 端提供生物素化：生物素-N 端、賴氨酸-生物素-肽中間和賴氨酸-生物素-C 端。
專肽生物還可以使用 Ahx 接頭或長(zhǎng)碳 (LC) 接頭提供生物素化：生物素-Ahx-N 末端、Lys-Ahx-生物素-肽中間、Lys-Ahx-生物素-C-末端。

（生物素結(jié)構(gòu)）

示例：
GRGDS在N端和C端標(biāo)記生物素的結(jié)構(gòu)展示。

1、GRGDS在N端標(biāo)記生物素，不增加Ahx 接頭

2、GRGDS在N端標(biāo)記生物素，增加一個(gè)Ahx 接頭

3、GRGDS在C端標(biāo)記生物素，不增加Ahx 接頭

4、GRGDS在C端標(biāo)記生物素，增加一個(gè)Ahx 接頭。

Ruitian Liu, et al. Residues 17-20 and 30-35 of beta-amyloid play critical roles in aggregation. J Neurosci Res. 2004 Jan 15;75(2):162-71. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14705137/
J Näslund, et al. The metabolic pathway generating p3, an A beta-peptide fragment, is probably non-amyloidogenic. Biochem Biophys Res Commun. 1994 Oct 28;204(2):780-7 : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/7980542/

多肽Biotin-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-COOH的合成步驟：

1、合成CTC樹(shù)脂：稱取1.7g CTC Resin（如初始取代度約為0.94mmol/g）和1.92mmol Fmoc-Val-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時(shí)CTC樹(shù)脂體積會(huì)增大好幾倍，避免DCM溶液過(guò)少），再加入4.79mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反應(yīng)2-3小時(shí)后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇，封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次（這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng)）。得到  Fmoc-Val-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下：

2、脫Fmoc：加3倍樹(shù)脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Val-CTC Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取4.79mmol Fmoc-Val-OH 氨基酸，加入到上述樹(shù)脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入9.59mmol DIPEA，4.55mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測(cè)為無(wú)色。用2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌3次樹(shù)脂。（洗滌樹(shù)脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Val-Val-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹(shù)脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Phe-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Phe-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Phe-Phe-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Phe-Phe-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Val-Phe-Phe-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

H2N-Val-Phe-Phe-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

Fmoc-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin

以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫(huà)出。

最后再經(jīng)過(guò)步驟二得到 H2N-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如下：

5、生物素反應(yīng)連接：在上述樹(shù)脂中，加入適當(dāng)DMF后，再加入4.79mmol 生物素到樹(shù)脂中，再加入9.59mmol DIPEA、4.55mmol HBTU，鼓氮?dú)夥磻?yīng)30分鐘。用2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌3次樹(shù)脂（洗滌樹(shù)脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。 得到Biotin-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-CTCResin。 結(jié)構(gòu)如下：

6、切割：6倍樹(shù)脂體積的切割液（或每1g樹(shù)脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過(guò)濾掉樹(shù)脂，用冰無(wú)水乙醚沉淀濾液，并用冰無(wú)水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品Biotin-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-COOH。結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒(méi)有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過(guò)這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。

7、最后總結(jié)：

杭州專肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com）主營(yíng)定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類長(zhǎng)肽，短肽，環(huán)肽，提供各類修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書(shū)肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽等。

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