Endothelin-1 (1-31) (Human) TFA 是一種有效的血管收縮劑和血壓升高劑。Endothelin-1 (1-31) (Human) TFA 來(lái)源于 chymase 對(duì)大 ET-1 的選擇性水解。

Endothelin-1 (1-31) (Human) TFA is a potent vasoconstrictor and hypertensive agent. Endothelin-1 (1-31) (Human) TFA is derived from the selective hydrolysis of big ET-1 by chymase.

二硫鍵廣泛存在與蛋白結(jié)構(gòu)中，對(duì)穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)具有非常重要的意義，二硫鍵一般是通過(guò)序列中的2個(gè)Cys的巰基，經(jīng)氧化形成。
 

形成二硫鍵的方法很多：空氣氧化法，DMSO氧化法，過(guò)氧化氫氧化法等。
 

二硫鍵的合成過(guò)程，  可以通過(guò)Ellman檢測(cè)以及HPLC檢測(cè)方法對(duì)其反應(yīng)進(jìn)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)。  
   

如果多肽中只含有1對(duì)Cys，那二硫鍵的形成是簡(jiǎn)單的。多肽經(jīng)固相或液相合成，然后在pH8-9的溶液中進(jìn)行氧化。      
 

當(dāng)需要形成2對(duì)或2對(duì)以上的二硫鍵時(shí)，合成過(guò)程則相對(duì)復(fù)雜。盡管二硫鍵的形成通常是在合成方案的最后階段完成，但有時(shí)引入預(yù)先形成的二硫化物是有利于連合或延長(zhǎng)肽鏈的。通常采用的巰基保護(hù)基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多種基團(tuán)。我們分別列出兩種以2-Cl樹(shù)脂和Rink樹(shù)脂為載體合成的多肽上多對(duì)二硫鍵形成路線(xiàn)：
 

二硫鍵反應(yīng)條件選擇    
 

 二硫鍵即為蛋白質(zhì)或多肽分子中兩個(gè)不同位點(diǎn)Cys的巰基（-SH）被氧化形成的S-S共價(jià)鍵。 一條肽鏈上不同位置的氨基酸之間形成的二硫鍵，可以將肽鏈折疊成特定的空間結(jié)構(gòu)。多肽分 子通常分子量較大，空間結(jié)構(gòu)復(fù)雜，結(jié)構(gòu)中形成二硫鍵時(shí)要求兩個(gè)半胱氨酸在空間距離上接近。 此外，多肽結(jié)構(gòu)中還原態(tài)的巰基化學(xué)性質(zhì)活潑，容易發(fā)生其他的副反應(yīng)，而且肽鏈上其他側(cè)鏈 也可能會(huì)發(fā)生一系列修飾，因此，肽鏈進(jìn)行修飾所選取的氧化劑和氧化條件是反應(yīng)的關(guān)鍵因素， 反應(yīng)機(jī)理也比較復(fù)雜，既可能是自由基反應(yīng)，也可能是離子反應(yīng)。      

反應(yīng)條件有多種選擇，比如空氣氧化，DMSO氧化等溫和的氧化過(guò)程，也可以采用H2O2，I2， 汞鹽等激烈的反應(yīng)條件。
 

空氣氧化法： 空氣氧化法形成二硫鍵是多肽合成中最經(jīng)典的方法，通常是將巰基處于還原態(tài)的多肽溶于水中，在近中性或弱堿性條件下（PH值6.5-10），反應(yīng)24小時(shí)以上。為了降低分子之間二硫鍵形成的可能，該方法通常需要在低濃度條件下進(jìn)行。
 

碘氧化法：將多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中，逐滴滴加10-15mol/L的碘進(jìn)行氧化，反應(yīng)15-40min。當(dāng)肽鏈中含有對(duì)碘比較敏感的Tyr、Trp、Met和His的殘基時(shí)，氧化條件要控制的更精確，氧化完后，立即加入維生素C或硫代硫酸鈉除去過(guò)量的碘。 當(dāng)序列中有兩對(duì)或多對(duì)二硫鍵需要成環(huán)時(shí)，通常有兩種情況：
 

自然隨機(jī)成環(huán):       序列中的Cys之間隨機(jī)成環(huán)，與一對(duì)二硫鍵成環(huán)條件相似；
 

定點(diǎn)成環(huán)：       定點(diǎn)成環(huán)即序列中的Cys按照設(shè)計(jì)要求形成二硫鍵，反應(yīng)過(guò)程相對(duì)復(fù)雜。在 固相合成多肽之前，需要提前設(shè)計(jì)幾對(duì)二硫鍵形成的順序和方法路線(xiàn)，選擇不同的側(cè)鏈 巰基保護(hù)基，利用其性質(zhì)差異，分步氧化形成兩對(duì)或多對(duì)二硫鍵。       通常采用的巰基保護(hù) 基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多種基團(tuán)。

多肽H2N-Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Val-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val-Pro-Tyr-COOH的合成步驟：

1、合成CTC樹(shù)脂：稱(chēng)取0.6g CTC Resin（如初始取代度約為0.52mmol/g）和0.37mmol Fmoc-Tyr(tBu)-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時(shí)CTC樹(shù)脂體積會(huì)增大好幾倍，避免DCM溶液過(guò)少），再加入0.94mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反應(yīng)2-3小時(shí)后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇，封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次（這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng)）。得到  Fmoc-Tyr(tBu)-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下：

2、脫Fmoc：加3倍樹(shù)脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Tyr(tBu)-CTC Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取0.94mmol Fmoc-Pro-OH 氨基酸，加入到上述樹(shù)脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入1.87mmol DIPEA，0.89mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測(cè)為無(wú)色。用2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌3次樹(shù)脂。（洗滌樹(shù)脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹(shù)脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

H2N-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

Fmoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin

以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專(zhuān)肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫(huà)出。

最后再經(jīng)過(guò)步驟二得到 H2N-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Val-Val-Pro-Tyr(tBu)-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如下：

5、切割：6倍樹(shù)脂體積的切割液（或每1g樹(shù)脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過(guò)濾掉樹(shù)脂，用冰無(wú)水乙醚沉淀濾液，并用冰無(wú)水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品H2N-Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Val-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val-Pro-Tyr-COOH。結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒(méi)有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過(guò)這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。

7、最后總結(jié)：

杭州專(zhuān)肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://amynixphotography.com）主營(yíng)定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類(lèi)長(zhǎng)肽，短肽，環(huán)肽，提供各類(lèi)修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書(shū)肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽等。

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