400-998-5282
專注多肽 服務(wù)科研
編號(hào):451618
CAS號(hào):
單字母:H2N-NSKRQRIVIF-pT-QGRDDTIMATKKKK-OH
磷酸肽
在生命過(guò)程中發(fā)揮重要作用,磷酸化的位置在多肽上的Tyr、Ser,Thr,。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸,目前使用的都是單芐基磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法,但是目前采用該方法合成磷酸化多肽也有缺點(diǎn),特別是在合成多磷酸化多肽或氨基酸較長(zhǎng)的多肽的時(shí)候,連接效率低,最后產(chǎn)品純度很低,對(duì)于這種磷酸化多肽,我們考慮采用后磷酸化方法,其合成過(guò)程就是在多肽合成結(jié)束后,選擇性脫去要標(biāo)記的氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基,對(duì)于Tyr,Thr可以直接使用側(cè)鏈不保護(hù)的氨基酸進(jìn)行反應(yīng),而Ser可以采用Fmoc-Ser(trt),在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。
后磷酸化,采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體,連接到羥基上,隨后在過(guò)氧酸下氧化生成磷酰基,完成反應(yīng)。
目前,多肽的磷酸化修飾方法主要有兩種:
(1)將適當(dāng)保護(hù)的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中;
(2)多肽序列在樹(shù)脂上合成完后,再對(duì)其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進(jìn)行磷酸化。
1)將適當(dāng)保護(hù)的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中:
即事先將需要磷酸化的氨基酸(Thr,Ser或Tyr)磷酸化并適當(dāng)保護(hù),然后按照正常SPPS 合成流程將磷酸化單體縮合到多肽指定位點(diǎn)。這種方法操作簡(jiǎn)便,已經(jīng)成為多肽單位點(diǎn) 磷酸化修飾的主要方法。
2)多肽序列在樹(shù)脂上合成完后,再對(duì)其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進(jìn)行磷酸化:
采用將磷酸化單體縮合到多肽中的方法進(jìn)行磷酸化修飾時(shí),磷酸化的氨基酸由于側(cè)鏈修 飾的較大基團(tuán)產(chǎn)生的位阻而導(dǎo)致難以與肽鏈縮合,并且之后的氨基酸引入都會(huì)比較困難, 尤其在含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)修飾時(shí),合成將變得異常困難,并且最終產(chǎn)物成分復(fù)雜,難 以分離,產(chǎn)率極低。
因此,當(dāng)肽鏈中多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化時(shí),可以考慮采用將多肽序列 在樹(shù)脂上合成完后,再對(duì)其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進(jìn)行磷酸化:其合成過(guò)程主要 就是在多肽合成結(jié)束之后,選擇性的脫去要標(biāo)記氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基,對(duì)于Tyr,Thr可 以直接使用側(cè)鏈不保護(hù)的氨基酸進(jìn)行反應(yīng)。
側(cè)鏈保護(hù)基在1%TFA/DCM條件下可以定量的脫 除。采用這種方法時(shí),可以采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體, 連接到羥基上,然后在過(guò)氧酸條件下氧化生成磷?;?,完成反應(yīng)。