熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵體系化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，受到紫外光或藍(lán)紫光照射時(shí)，可激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時(shí)，發(fā)出熒光。熒光標(biāo)記技術(shù)指利用熒光物質(zhì)共價(jià)結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個(gè)基團(tuán)上，利用它的熒光特性來提供被研究對(duì)象的信息。熒光標(biāo)記的無放射物污染，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，使得熒光標(biāo)記物在許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛。人們利用利用熒光標(biāo)記的多肽來檢測(cè)目標(biāo)蛋白的活性，并將其發(fā)展的高通量活性篩選方法應(yīng)用于疾病治療靶點(diǎn)蛋白的藥物篩選和藥物開發(fā)（例如，各種激酶、磷酸酶、肽酶等）。專肽生物經(jīng)過長(zhǎng)期開發(fā)，能夠提供技術(shù)成熟的各種熒光標(biāo)記多肽。

• 熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Fluorescence resonance energy transfer, FRET)

   

  

        熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET)是一種非輻射能量躍遷，通過分子間的電偶極相互作用，將供體激發(fā)態(tài)能量轉(zhuǎn)移到受體激發(fā)態(tài)的過程。此過程沒有光子的參與，所以是非輻射的。該分析方法具有快速、敏感和簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
        用于FRET試驗(yàn)的染料是可以相同的。但在大多數(shù)應(yīng)用中其實(shí)是使用不同的染料。例如，一個(gè)供體基團(tuán)（EDANS）和接受基因（DABCYL）勻被連接到一HIV蛋白酶的天然底物上，當(dāng)該底物未被切斷時(shí)，DABCYL可淬滅EDANS，從而檢測(cè)不到熒光。當(dāng)該底物被HIV-1蛋白酶切斷后，EDANS不再被DABCYL淬滅，隨即可檢測(cè)到EDANS熒光。蛋白酶抑制劑的有效性可憑借EDANS熒光強(qiáng)度的變化進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
        FRET肽是研究肽酶特異性的便利工具，由于其反應(yīng)過程可被連續(xù)監(jiān)測(cè)，為酶活性的檢測(cè)提供了一個(gè)便捷的方法。供體/受體對(duì)的肽鍵水解后產(chǎn)生的熒光可衡量納摩爾級(jí)濃度的酶活性。當(dāng)FRET肽是完整的，表現(xiàn)出的是內(nèi)部的熒光猝滅，但當(dāng)供體/受體對(duì)的任何肽鍵斷裂就會(huì)釋放出熒光，此熒光可被連續(xù)檢測(cè)，從而可對(duì)酶的活性進(jìn)行定量分析。FRET 肽可作為各類酶研究的合適底物，比如：肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的動(dòng)力特征和功能特征；對(duì)新的蛋白水解酶的篩選和檢測(cè)；對(duì)多肽折疊的構(gòu)象研究等。

1、常用FRET的標(biāo)準(zhǔn)染料組合。

2、FRET共振能量轉(zhuǎn)移引發(fā)熒光猝滅的激發(fā)與發(fā)射波

3、常規(guī)RET供體(Donor)-接受(Aceptor)對(duì)的福斯特臨界距離(Forster Critical Distance)