摘要: 本研究的目的是制備 T7 肽修飾的載長(zhǎng)春新堿低密度脂蛋白 (T7 peptide modified vincristine loaded low densitylipoprotein, T7-LDL-VCR) 納米粒, 用于血腦屏障 (blood brain barrier, BBB) 和腦腫瘤細(xì)胞雙級(jí)靶向藥物遞送。首先通過(guò)超速離心法從人血漿中提取 LDL 納米粒, 然后采用干膜法將藥物載入納米粒脂質(zhì)內(nèi)核, 再將 T7 肽共價(jià)修飾于納米粒表面, 表征其粒徑、包封率和靶頭連接效率。以 DiR 為探針, 通過(guò)活體成像觀察T7-LDL-VCR 納米粒在荷腦膠質(zhì)瘤小鼠腦部中的分布情況, 通過(guò)核磁共振成像 (magnetic resonance imaging, MRI) 觀察納米粒對(duì)腦膠質(zhì)瘤的治療作用, 最后對(duì)小鼠的相對(duì)腫瘤體積和生存曲線進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明: 制備的T7-LDL-VCR 納米粒粒徑約 30 nm, 包封率為 30.1%, T7-VCR-LDL 的靶頭連接效率為 63.88%; 在小鼠體內(nèi)的腦靶向性及對(duì)腦膠質(zhì)瘤治療作用良好: T7-VCR-LDL、LDL-VCR 和 VCR 的相對(duì)腫瘤體積分別為 30%, 51.50% 和79.25%; 中位生存期為 36 天, 高于 VCR-LDL 1.38 倍、游離 VCR 1.85 倍和對(duì)照組 2 倍。本研究表明, T7-LDL-VCR具有 BBB 和腦腫瘤細(xì)胞雙級(jí)靶向能力, 是一種有前景的靶向治療制劑。

腦膠質(zhì)瘤作為惡性腫瘤之一, 嚴(yán)重危及人類生命。因膠質(zhì)瘤強(qiáng)浸潤(rùn)性的特點(diǎn)使得患者預(yù)后極差[1, 2], 且中位生存期低于 16 個(gè)月[3]。發(fā)生浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞可以存在于遠(yuǎn)離腫瘤原發(fā)部位的腦組織中, 甚至可以存在于對(duì)側(cè)大腦半球, 并由正常腦組織包被, 擁有正常的血液供應(yīng)及血腦屏障的保護(hù)作用[4], 血腦屏障的存在使得大部分化學(xué)藥物無(wú)法透過(guò) BBB進(jìn)入腦內(nèi)[5]。因此, 手術(shù)治療無(wú)法將腫瘤切除干凈, 容易導(dǎo)致復(fù)發(fā)[6], 而放射治療也不能全部殺死癌細(xì)胞, 并且不良反應(yīng)大, 容易導(dǎo)致放射性癡呆。因而, 構(gòu)建一個(gè)可以有效殺傷原發(fā)及浸潤(rùn)區(qū)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的主動(dòng)靶向藥物遞送系統(tǒng), 是膠質(zhì)瘤細(xì)胞綜合治療策略中至關(guān)重要的一步[3]。
低密度脂蛋白 (low density lipoprotein, LDL) 受體相關(guān)蛋白是一個(gè)廣泛存在于細(xì)胞表面的跨膜內(nèi)吞受體蛋白, 在腦內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、星形細(xì)胞和肝細(xì)胞等均呈現(xiàn)高表達(dá)。研究表明, LDL受體家族在 BBB 上存在高表達(dá)[7]。LDL 是內(nèi)源性、大小約為 22 nm 的球形納米微粒, 其殼表面的載脂蛋白基本只有一種, 即 ApoB-100。它使 LDL 能夠特異性地識(shí)別細(xì)胞表面的 LDL 受體, 從而介導(dǎo) LDL 的內(nèi)吞, 并且可以通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)的方式將其他靶向分子修飾在 ApoB-100 上, 起到多靶點(diǎn)靶向作用。腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和許多惡性腫瘤細(xì)胞上還過(guò)度表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白 (transferrin, Tf) 受體, T7 和 Tf 與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的特異性配體的結(jié)合能力相當(dāng), 并且 T7 肽具有極大優(yōu)勢(shì): 內(nèi)源性 Tf 反而會(huì)促進(jìn) T7 修飾的納米載體與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體發(fā)生特異性結(jié)合[8]。因此, 將 T7 共價(jià)修飾于 LDL 載體表面, 期待兩者協(xié)同作用達(dá)到雙級(jí)靶向的效果, 穿透 BBB 后進(jìn)一步靶向于腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)從人血漿中提取 LDL, 通過(guò)雙功能基團(tuán)將T7 插入至 LDL 表面的載脂蛋白上, 并通過(guò)熒光探針標(biāo)記結(jié)合超濾離心法, 對(duì)插入的效率進(jìn)行評(píng)價(jià), 間接證明 T7-LDL 復(fù)合物的生成。
長(zhǎng)春新堿 (vincristine, VCR) 為廣譜抗腫瘤藥, 通過(guò)與微管蛋白結(jié)合, 阻止微管裝配并阻礙紡錘體形成, 使細(xì)胞分裂停止于 M 期[9]。長(zhǎng)春新堿為脂溶性藥物, 有較強(qiáng)抗腫瘤效果, 毒性也較大, 將它包載于LDL 疏水內(nèi)核中可以提高其靶向性, 提高其對(duì)腦膠質(zhì)瘤的治療作用。因此, 構(gòu)建 T7-LDL-VCR 納米給藥系統(tǒng)穿透 BBB 靶向于腦膠質(zhì)瘤具有良好的理論基礎(chǔ)。
材料與方法
主要儀器 納米粒徑儀 (美國(guó) Symptec 公司); 激光共聚焦 (德國(guó) Zeiss 公司); 低溫超速離心機(jī)、透射電子顯微鏡 (日本 Hitachi 公司); 活體成像儀 (美國(guó) Caliper 公司); 細(xì)胞超聲破碎儀 (寧波新芝生物科技有限公司)。
藥品與試劑 T7 肽 ; 硫酸長(zhǎng)春新堿 (廣州白云山現(xiàn)代漢方藥業(yè)有限公司); 75% 乙醇消毒液 (山東利爾康醫(yī)療科技股份有限公司); 三氯甲烷、二甲基亞砜、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、二乙胺 (國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司); 甲醇、乙腈 (Fisher 公司); 氫氧化鈉 (西隴科學(xué)股份有限公司); 胎牛血清 (浙江天杭生物科技股份有限公司); DMEM 培養(yǎng)基、1640 培養(yǎng)基 (美國(guó) Thermo Fisher Scientific 公司)。
動(dòng)物 昆明小鼠, 體重 22～24 g, 雌雄各半。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心, 動(dòng)物合格證號(hào): SCXK (京) 2007-004。
LDL 納米粒的制備[10]
 本研究采用密度梯度離心法從人血漿中提取 LDL。先將血漿在室溫下溶解, 高速離心 (8 000 r·min−1, 10 min, 4 ℃), 吸棄最上層白色的乳糜微粒; 按 Radding-Steining 公式計(jì)算需加入的干燥 KBr 重量: X=V0 (d1−d0)/(1−0.312d1)。式中, V0 代表原血漿毫升數(shù), d0 代表初始血漿密度, d1 代表需調(diào)定的血漿密度, 0.312 為 KBr 的比容 (mL·g−1), X代表需加 KBr 克數(shù)。然后用干燥 KBr 調(diào)血漿密度至1.300 g·mL−1, 離心時(shí)在其上層鋪加約等體積的密度為 1.006 g·mL−1的 NaCl溶液, 仔細(xì)配平后, 設(shè)置各項(xiàng)參數(shù): 溫度 4℃, 15 000´ g 離心 120 min。提取成功后加入 2%蔗糖溶解于 LDL 納米粒的懸液中, 凍干, 置于−20℃冰箱儲(chǔ)存。 
LDL 納米粒的鑒定[11]
 紅外吸收光譜法可用于分子結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)研究, 根據(jù)光譜的峰位、強(qiáng)度及峰形來(lái)判斷化合物的類別。因此, 用紅外光譜法測(cè)定樣品的結(jié)構(gòu), 可以判斷 LDL 是否從血漿中提取成功。
T7-LDL-VCR 納米粒的制備 采用干膜法制備載長(zhǎng)春新堿低密度脂蛋白 (vincristine loaded low density lipoprotein, LDL-VCR) 納米粒[12], 首先精 密稱取 LDL 凍干樣品 120 mg, 加磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline, PBS) 2 mL 溶解; 然后精密稱取 VCR 15 mg 溶于 3 mL 氯仿, 與上述 LDL 溶液混合于茄形瓶中減壓旋蒸 (40 ℃, 100 r·min−1) 得干燥膜后, 加入 5 mL PBS (pH 8.0) 水化 30 min 后, 用細(xì)胞超聲破碎儀超聲 (3 號(hào)探頭, 60%, 共 30 min: 超聲 5 s, 停 1 s) 后, 置于 EP 管中備用。再取 5 mg 馬來(lái)酰亞胺−聚乙二醇 (polyethylene glycol, PEG) 3500-N-羥基琥珀酰亞胺雙功能基團(tuán) (MAL-PEG3500-NHS) 和 T7 肽 10 mg溶于 PBS 溶液中, 于室溫下反應(yīng) 2 h, 使 MAL-PEG3500-NHS 中 MAL 基團(tuán)與 T7 肽半胱氨酸殘基上巰基發(fā)生特異性的反應(yīng)生成 T7-PEG3500-NHS, 然后再將 T7-PEG3500-NHS 與上述備用的 LDL-VCR納米?；旌? 室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24 h, 使LDL表面上的伯氨基與雙官能 PEG 衍生物的末端 NHS 基團(tuán)特異性 反應(yīng)。最后用截留分子質(zhì)量 (molecular mass cutoff, MWCO) 為 300 kDa 透析袋去除未反應(yīng)的 T7-PEG3500- NHS, 制得 T7-LDL-VCR 納米?；鞈乙?。
包封率的測(cè)定 采用超濾離心法對(duì)納米粒的包封率進(jìn)行測(cè)定, 所得樣品借助高效液相色譜 (high performance liquid chromatography, HPLC) 進(jìn)行定量分析。
色譜條件 色譜柱為 ZORBA×SB-C8 柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm); 流動(dòng)相為 1.5%二乙胺溶液: 甲醇 (30∶70, w/w); 流速: 1.0 mL·min−1; 檢測(cè)波長(zhǎng): 297 nm; 柱溫: 30 ℃; 進(jìn)樣量: 20 μL。
測(cè)定方法 取 T7-LDL-VCR 納米?；鞈乙簝煞? 一份用超濾離心管離心 (13 000 r·min−1, 10 min) 后取濾過(guò)液得到游離 VCR 質(zhì)量 (W 游離 VCR); 另一份加入 Triton-X100 (200 μL·mL−1) 振蕩后超聲 30 min, 超濾離心得總 VCR 質(zhì)量 (W 總 VCR)。用 HPLC 儀對(duì)樣品進(jìn)行分析, 計(jì)算包封率 (encapsulation efficiency, EE)。
EE = (W 總 VCR−W 游離 VCR)/W 總 VCR´ 100% 
T7 肽插入 LDL-VCR 納米粒效率的評(píng)價(jià) 對(duì)于多肽、蛋白等生物大分子為靶向識(shí)別的載體, 靶頭插入的定性和定量評(píng)價(jià)存在困難, 尤其是對(duì)于多肽性靶頭, 目前尚未有高效簡(jiǎn)便的方法來(lái)判斷靶頭與載體連接復(fù)合物的是否生成。本研究通過(guò)熒光探針標(biāo)記結(jié)合超濾離心法, 對(duì)T7肽插入 LDL的效率進(jìn)行評(píng)價(jià), 也間接證明了反應(yīng)產(chǎn)物——連接復(fù)合物的生成。
熒光探針標(biāo)記與表征 先用 MAL-PEG-NHS 中的馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)與巰基化的 T7 發(fā)生 Michael 加成反應(yīng), 然后再利用 NHS-PEG-T7 中 T7 含有的伯胺與5(6)-羧基二乙酸熒光素 [5-(6)-carboxtfluores cein diacetate, CFDA] 的羧基反應(yīng)連接, 實(shí)現(xiàn)雙功能基團(tuán)的探針標(biāo)記。精密稱取 CFDA 5.0 mg, 溶于 1 mL 二甲基亞砜, 依次加入 N, N'-二環(huán)己基碳酰亞胺 2.4 mg和 NHS 1.3 mg。該體系室溫避光攪拌 24 h, 離心 (4 000 r·min−1, 15 min) 除去不溶物, 上清液轉(zhuǎn)移后加入 2 mg NHS-PEG3500-T7 和 1 μL 三乙胺, 室溫避 光反應(yīng) 24 h, 所得體系以雙蒸水避光透析 (MWCO 3 500 Da) 24 h, 冷凍干燥, 得膨松狀固體產(chǎn)物。取少量 NHS-PEG3500-T7 和 NHS-PEG3500-T7 (CFDA) 樣 品進(jìn)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜 (matrixassisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS) 分析確證。
紫外光譜掃描 采用紫外−可見(jiàn)分光光度檢測(cè)熒光標(biāo)記的功能基團(tuán)插入至 LDL 載體的效率。取適量VCR 溶液、NHS-PEG-T7 (CFDA) 和 LDL 混懸液分別制備了 PBS (pH 7.4) 分散體系, 利用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì), 在 600～200 nm 內(nèi)進(jìn)行光譜掃描, 確定其最大吸收波長(zhǎng)。
CFDA 線性和范圍 精密稱取 CFDA 樣品 10 mg于 100 mL 量瓶中, 作為儲(chǔ)備液; 將上述 100 μg·mL−1儲(chǔ)備液分別用 PBS (pH 7.4) 稀釋成一系列濃度, 實(shí)際配制的 CFDA 質(zhì)量濃度分別為 1.50、2.00、2.50、3.00 和 3.50 μg·mL−1, 采用紫外−可見(jiàn)分光光度儀測(cè)定樣品在 493 nm 的吸光度 (A) , 以紫外吸收強(qiáng)度對(duì)濃度作圖, 并進(jìn)行線性回歸分析。
插入效率評(píng)價(jià) 將制備好的樣品稀釋 10 倍, 先用紫外−可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定總吸光度 (A總), 再將上述樣品放入超濾離心管中 (MWCO 300 kDa) 離心 (8 000 r·min−1, 15 min) 后, 收集下層液體, 稀釋 4 倍后測(cè)定游離吸光度 (A 游離), 根據(jù)公式: 靶頭連接率 =(10A 總−4A 游離)/10A 總×100%, 計(jì)算靶頭的連接效率。粒徑的測(cè)定及透射電鏡觀察 將樣品用 PBS (pH 7.4) 稀釋, 配成合適濃度后于納米粒徑儀中檢測(cè)。取 T7-LDL-VCR 納米粒 1 滴置于 300 目碳支持膜, 待其干燥后, 用醋酸鈾負(fù)染 10 min, 用濾紙小心吸干支持膜, 置于透射電鏡下觀察。
活體成像實(shí)驗(yàn) 
腦膠質(zhì)瘤原位模型的建立[13] 用 1%戊巴比妥 鈉麻醉小鼠, 劑量 0.2 mL/只, 頭部備皮, 用刀片刮開(kāi)顱骨骨膜約 5 mm, 暴露顱骨; 將小鼠頭部固定于腦立體定位儀上。以囟門為坐標(biāo)原點(diǎn), 在右側(cè) 1.8 mm處鉆孔, 以 1 μL·min−1 的速度注射 5 μL 活細(xì)胞懸液(1×106 個(gè)細(xì)胞), 針頭深度為 3 mm (進(jìn) 4 mm, 退 1 mm), 最后對(duì)小鼠進(jìn)行消毒和縫合。
活體成像觀察 將 DiR 的甲醇溶液加至 T7- LDL-VCR 混懸液中孵育 24 h 后, 于 PBS (pH 7.4) 溶液中透析 24 h, 制備得到載熒光探針 DiR 的 T7-LDLVCR 納米粒。將造模成功的小鼠, 隨機(jī)分為 3 組: ①尾靜脈注射 200 μL 生理鹽水為對(duì)照組; ② 注射載熒光探針 DiR 的 LDL-VCR 納米粒組; ③ 尾靜脈注射T7-LDL (DiR) 納米粒組。荷 C6 腦膠質(zhì)瘤小鼠治療作用的考察 給藥方案 選擇荷 C6 腦膠質(zhì)瘤小鼠 40 只, 隨機(jī)分成 4 組: ① 空白對(duì)照生理鹽水組; ② 游離 VCR 組; ③ LDL-VCR 組; ④ T7-LDL-VCR 組。每組 10 只, 采用尾靜脈注射, 參考相關(guān)文獻(xiàn)[14]報(bào)道給藥量為 1 mg·kg−1, 于腫瘤接種后第 8 天開(kāi)始給藥, 每?jī)商旖o藥 1 次, 共給藥 4 次。核磁共振成像與腫瘤體積抑制率測(cè)定 腫瘤接種后第 16 天 (給藥結(jié)束后第 2 天), 每組取小鼠 4 只, 用 1%異氟烷快速麻醉后進(jìn)行 MRI 檢查并計(jì)算相對(duì)腫瘤體積 (RTV), RTV =V 給藥組 /V 對(duì)照組×100%, 其中 V為腫瘤體積, 最后數(shù)據(jù)用 SPSS 進(jìn)行 t 檢驗(yàn)。生存曲線測(cè)定 給藥后, 每組取小鼠 6 只, 每天對(duì)其行為狀態(tài)進(jìn)行考察, 記錄小鼠活動(dòng)情況、癥狀和死亡日期, 考察生存曲線。用 SPSS 繪制卡普蘭−邁耶生存曲線 (Kaplan-Meier survival curves), 并計(jì)算生存時(shí)間中位數(shù)及生存時(shí)間平均數(shù)。
結(jié)果
1 LDL 納米粒的制備
用密度梯度離心法提取分離 LDL, 可見(jiàn)血漿脂蛋白自動(dòng)分層; 超速離心結(jié)束后可見(jiàn)離心管中液體分為 7 層, 結(jié)果見(jiàn)圖 1A。頂部乳白色為極低密度脂蛋白 (very low density lipoprotein, VLDL), 第 3 層淺黃色為 LDL, 第 5層淡黃色邊界不很清楚的為高密度脂蛋白 (high density lipoprotein, HDL), 最下層為無(wú)脂血清 (lipoprotein deficient serum, LPDS), 其余層為 NaCl 溶液。用注射長(zhǎng)針小心收集 LDL。在此過(guò)程中, LDL 與上下層的界面會(huì)出現(xiàn)逐漸明顯的折光面, 針頭旋轉(zhuǎn)收集, 可以提高收集效率[15]。

2 LDL 納米粒的鑒定
紅外結(jié)果 (圖 1B) 可見(jiàn), 在 3 282. 8 cm−1 的弱吸收峰為水分子的羥基 O-H 伸縮振動(dòng), 2 925 和 2 852 cm−1 是脂肪鏈的對(duì)稱與非對(duì)稱伸縮振動(dòng); LDL 中存在大量的酯鏈, 于磷脂、甘油三酯和膽固醇酯中。由圖中可見(jiàn), 1 736 cm−1 為磷脂酯鏈 C=O 的伸縮振動(dòng); 1 653 cm−1處強(qiáng)吸收峰歸屬于蛋白質(zhì)肽鍵中C=O的伸縮振動(dòng); 1 241 cm−1 為 P=O 鍵伸縮振動(dòng); 1 088 cm−1 處為 PO2-的均衡拉伸振動(dòng), 969 cm−1 處的峰為磷脂中膽堿聚集體 N+(CH3)3 的不對(duì)稱振動(dòng)峰, 這些特征峰與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致, 證明實(shí)驗(yàn)所采用方法適合從人血中提取 LDL 納米粒。
3 T7-LDL-VCR 納米粒包封率的測(cè)定
實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到, T7-LDL-VCR 納米粒的 EE 為30.1%。由參考文獻(xiàn)[12]可知, 此結(jié)果相對(duì)納米制劑而言相對(duì)偏低, 但是, 對(duì)于 LDL 包載親酯性藥物屬于正常值。
4 T7 肽插入 LDL-VCR 納米粒效率的評(píng)價(jià)
借助 MALDI-TOF MS 對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析。NHSPEG3500-T7 (圖 2A) 的理論相對(duì)分子質(zhì)量為 4 495, NHS-PEG3500-T7 (CFDA) (圖 2B) 的理論相對(duì)分子質(zhì)量為 4 935, 并且觀察到響應(yīng)的離子峰之間相差 44 個(gè)單位, 代表構(gòu)成 PEG 結(jié)構(gòu)中的重復(fù)單元-CH2CH2O-[16]。
4.1 紫外全波長(zhǎng)掃描 LDL 和 VCR 在波長(zhǎng)為 493 nm處對(duì) NHS-PEG3500-T7 (CFDA) 熒光檢測(cè)無(wú)干擾, 結(jié)果見(jiàn)圖 3A。

4.2 CFDA 的線性及范圍 CFDA 的線性回歸方程為A = 0.195 0C+ 0.007 1 (R2= 0.999 3, n = 5), 在 1.5～3.5 μg·mL−1 內(nèi)紫外吸收強(qiáng)度與濃度的線性關(guān)系良好, 結(jié)果見(jiàn)圖 3B。計(jì)算得到靶頭連接率為 63.88%。

5 T7-LDL-VCR 納米粒的構(gòu)建與表征
粒徑分布測(cè)試結(jié)果表明, T7-LDL-VCR 納米粒的平均粒徑為 30 nm (圖 4A); 由透射電鏡結(jié)果可知, 納米粒呈近圓形, 粒徑約 20～45 nm (圖 4B)。
6 活體成像
參考文獻(xiàn)[12]于 2 h 后采用活體成像 Spectrum-CT儀器進(jìn)行熒光強(qiáng)度的檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)圖 5 所示, 兩種LDL 納米粒載體均對(duì)小鼠腦膠質(zhì)瘤有靶向作用, 但是 DiR-T7-LDL 相對(duì) DiR-LDL 腦部富集作用更好, 說(shuō)明將 T7 肽共價(jià)修飾于 LDL 表面, 使載體達(dá)到了協(xié)同靶向于腦膠質(zhì)瘤的目的。

7 荷 C6 腦膠質(zhì)瘤小鼠治療作用的考察
荷瘤小鼠經(jīng) 4 次給藥治療后, MRI 結(jié)果顯示, 與對(duì)照組小鼠腦部腫瘤相比, VCR 溶液或含 VCR 載體均對(duì)腦瘤有治療作用, 且 T7-LDL-VCR 效果最為顯著 (圖 6A); 采用核磁技術(shù)對(duì)荷瘤小鼠腦組織進(jìn)行掃描, 可以獲得腫瘤體積, 進(jìn)而計(jì)算得到相對(duì)腫瘤體積, 結(jié)果顯示, 游離 VCR 為 (79.25 ± 8.14) %, LDL-VCR為 (51.50 ± 4.73) %, T7-LDL-VCR 為 (30.00 ± 4.32) % (圖 6B)。T7-LDL-VCR 比 LDL-VCR 的瘤抑制作用更強(qiáng)。給藥后, 觀察記錄小鼠活動(dòng)情況、癥狀和死亡日期, 根據(jù)觀察結(jié)果繪制 Kaplan-Meier survival 曲線可知, 生存時(shí)間平均值和中位值分別為 30.57 和 36 天(圖 6C), 分別是 VCR-LDL 的 1.69 和 1.38 倍、游離VCR 的 1.81 和 1.85 倍。說(shuō)明 T7 修飾的 LDL 可增強(qiáng)LDL 對(duì)腦瘤的靶向作用。

討論
低密度脂蛋白靶向機(jī)制: 一方面是納米粒具有被動(dòng)靶向作用, 能通過(guò)滲透滯留效應(yīng)聚集于腫瘤部位; 另一方面是經(jīng) T7 修飾或未修飾的載脂蛋白B-100 所產(chǎn)生的主動(dòng)靶向作用, 基于上述作用原理, 本研究構(gòu)建了 T7-LDL-VCR 藥物遞送系統(tǒng), 并借助MALDI-TOF MS 定性分析 T7 與 LDL 載體連接后 的產(chǎn)物和效率, 但在某些情況下, 由于機(jī)器飄移或其他原因的影響, 導(dǎo)致實(shí)際響應(yīng)離子峰與理論上不完全一致。
通過(guò)包含不同的探針對(duì)載體在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行追蹤, 提高了成像方法的安全性、特異性和靈敏度[17]。本文用 DiR 標(biāo)記 LDL 及 T7-LDL 納米粒, 觀察納米粒對(duì)腦膠質(zhì)瘤的體內(nèi)靶向性。結(jié)果顯示, 載VCR 的 LDL 納米粒相比游離藥物均有較強(qiáng)的腦瘤 靶向性及治療作用, 且 T7-LDL-VCR 體內(nèi)效果優(yōu)于LDL-VCR 納米粒, 這說(shuō)明 LDL 作為納米載體的可行性, 用 T7 修飾 LDL 可達(dá)到 BBB 和腦腫瘤細(xì)胞雙級(jí)靶向效果