摘要：多肽藥物是一類重要而特別的藥物。但相比普通小分子化學(xué)藥，目前各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)和國(guó)際組織對(duì)多肽化學(xué)藥物的技術(shù)要求尚不完善。本文就多肽化學(xué)仿制藥質(zhì)量研究的一些特殊技術(shù)要求進(jìn)行探討，通過(guò)一些案例分析提示應(yīng)采用不同原理的分析方法并結(jié)合品種特點(diǎn)全面說(shuō)明仿制藥與參比制劑的一致性及雜質(zhì)控制策略的合理性，以提高多肽化學(xué)仿制藥的研究水平和通過(guò)率。
多肽藥物為氨基酸通過(guò)肽鍵連接而成的一類化合物（見(jiàn)圖1），目前尚無(wú)法準(zhǔn)確定義，通常具有明顯的生物活性的多肽都可視為多肽藥物。多肽藥物可通過(guò)從天然物質(zhì)中提取、化學(xué)合成、天然微生物發(fā)酵及生物重組表達(dá)等手段制備得到。從藥品注冊(cè)的角度講，各國(guó)監(jiān)管部門均按照多肽的制備方法對(duì)這類藥品進(jìn)行分類，如化學(xué)合成肽均按照化學(xué)藥品進(jìn)行管理，重組表達(dá)肽均按照生物制品進(jìn)行管理等。此外，美國(guó)FDA進(jìn)一步細(xì)分不超過(guò)40個(gè)氨基酸組成的多肽及41~99個(gè)全合成多肽為多肽化學(xué)藥物，41~99個(gè)非化學(xué)合成多肽或100個(gè)以上氨基酸組成的多肽為多肽類生物制品[1]，其他監(jiān)管機(jī)構(gòu)尚未見(jiàn)相關(guān)表述。目前全球已批準(zhǔn)上市多肽的藥物有100種以上，并有多種藥品已在國(guó)內(nèi)上市[2]，涉及生殖、消化、血液、婦科、外科、神經(jīng)、腫瘤、內(nèi)分泌等各適應(yīng)證領(lǐng)域，且不乏利拉魯肽、格拉替雷、戈舍瑞林這樣的重磅品種，說(shuō)明國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥企業(yè)對(duì)多肽藥物的研發(fā)和申報(bào)充滿熱情。但與普通小分子藥物相比，多肽藥物具有分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜、活性高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，同時(shí)穩(wěn)定性相對(duì)較差，并可能存在諸如免疫原性等的特殊安全性問(wèn)題。這種情況下，對(duì)該類藥物的研發(fā)及監(jiān)管提出了更高挑戰(zhàn)。本文參考現(xiàn)有技術(shù)法規(guī)，特別是國(guó)際監(jiān)管同行的研究及審評(píng)經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)案例，對(duì)一些多肽化學(xué)仿制藥質(zhì)量研究過(guò)程中需要關(guān)注的一些特殊技術(shù)要求進(jìn)行簡(jiǎn)介，希望為我國(guó)多肽化學(xué)仿制藥的研發(fā)和監(jiān)管提供一些有意義的借鑒。
1多肽化學(xué)仿制藥的監(jiān)管現(xiàn)狀
相比普通小分子化學(xué)藥，目前各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)和國(guó)際組織對(duì)多肽化學(xué)藥物的技術(shù)要求尚不完善，法規(guī)文件相對(duì)缺乏，存在一定的監(jiān)管空白。表1中列舉了各國(guó)及國(guó)際監(jiān)管機(jī)構(gòu)目前僅有的幾個(gè)涉及多肽化學(xué)藥物的官方技術(shù)支持文件。
其中國(guó)家藥品監(jiān)督管理局（以下簡(jiǎn)稱國(guó)家局）早在2007年就出臺(tái)了《合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，說(shuō)明我國(guó)很早就開(kāi)始重視這類藥物的研發(fā)和監(jiān)管問(wèn)題，同時(shí)在《化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究技術(shù)指導(dǎo)原則》中也提到了關(guān)于多肽藥物的一些關(guān)鍵技術(shù)要求。上述指導(dǎo)原則在出臺(tái)后的10多年間對(duì)我國(guó)多肽化學(xué)藥物的發(fā)展起到了一定的促進(jìn)作用，但由于種種原因未能及時(shí)升級(jí)更新，已不能充分滿足目前多肽藥物研究與審評(píng)的需要，且在我國(guó)仿制藥一致性評(píng)價(jià)的大背景下，考慮到多肽藥物的復(fù)雜性，上述指導(dǎo)原則在評(píng)價(jià)仿制藥與參比制劑的一致性方面還有進(jìn)一步完善的空間。最近，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心為進(jìn)一步指導(dǎo)化學(xué)合成多肽藥物的藥學(xué)研究，提供可參考的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，于2023年2月發(fā)布了《化學(xué)合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》[3]，為未來(lái)一段時(shí)間內(nèi)我國(guó)多肽仿制藥的研發(fā)和監(jiān)管提供了依據(jù)。國(guó)外監(jiān)管機(jī)構(gòu)中，ICH Q系列指導(dǎo)原則中的Q3A和Q3B明確不適用于肽類藥物；Q6A顯示適用于小于10個(gè)氨基酸的低分子量合成肽，但不適用于高分子肽和多肽，且并未就多肽化學(xué)藥物的特殊要求進(jìn)行專門闡述；Q6B明確不適用于合成肽。歐盟未曾發(fā)布專門針對(duì)多肽化學(xué)藥物的指導(dǎo)原則，僅在抗生素藥物雜質(zhì)限度指導(dǎo)原則及歐洲藥典藥用物質(zhì)通則中提到了多肽藥物雜質(zhì)控制的一般要求。美國(guó)FDA曾于1994年頒布過(guò)關(guān)于遞交合成多肽原料藥申請(qǐng)藥學(xué)資料的相關(guān)要求，但目前該文件已失效。不過(guò)美國(guó)FDA近期就多肽化學(xué)仿制藥的研究公布了多個(gè)復(fù)雜多肽仿制藥的個(gè)藥指南，并在2021年頒布了《仿制重組DNA來(lái)源藥物的高純度合成多肽藥物指導(dǎo)原則》[4]，說(shuō)明國(guó)際監(jiān)管機(jī)構(gòu)也開(kāi)始逐漸致力于完善多肽仿制藥監(jiān)管體系的建設(shè)工作。
2多肽化學(xué)仿制藥質(zhì)量研究的特殊技術(shù)要求
多肽化學(xué)仿制藥的藥學(xué)研究首先應(yīng)遵循國(guó)家局已經(jīng)發(fā)布的關(guān)于化學(xué)仿制藥一致性評(píng)價(jià)相關(guān)技術(shù)指南的一般要求，在此不過(guò)多贅述。但由于多肽主要由氨基酸構(gòu)成，其中化學(xué)合成肽還會(huì)引入很多非天然氨基酸，這使得這類藥物在制備方法、結(jié)構(gòu)確證、質(zhì)量研究等方面均存在與一般化學(xué)小分子藥物不同的問(wèn)題。
首先多肽為氨基酸組成的鏈狀、分支狀或環(huán)狀結(jié)構(gòu)，因此結(jié)構(gòu)確證時(shí)除運(yùn)用元素分析、光譜、質(zhì)譜等常規(guī)方法外，需要結(jié)合結(jié)構(gòu)特點(diǎn)采用一些不同于小分子化學(xué)藥的分析手段，包括但不限于：采用氨基酸組成和手性分析、序列分析或肽圖測(cè)繪等方法確定一級(jí)結(jié)構(gòu)，采用圓二色散、熒光光譜、光散射、X?射線衍射等確定高級(jí)結(jié)構(gòu)等，仿制藥除一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸序列必須與參比制劑相同外，高級(jí)結(jié)構(gòu)也需要與后者保持一致。另外，需要關(guān)注的是有些多肽藥物存在超分子聚集為寡聚物或多聚物的現(xiàn)象，該性質(zhì)與多肽藥物的活性及體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為均有較大關(guān)系，如何表征仿制藥與參比制劑聚集特性和聚集動(dòng)力學(xué)的一致存在一定難度，現(xiàn)有的研究方法包括分子排阻色譜法、光散射法、熒光分析法、分析超速離心法、凝膠電泳法、場(chǎng)流分離法、核磁共振法等。同時(shí)，也應(yīng)關(guān)注仿制藥與參比制劑在一些特殊物化特性（如分子量分布、表面電荷分布、黏度、光密度等）上的一致性。
在確保仿制藥與參比制劑結(jié)構(gòu)或物質(zhì)基礎(chǔ)等同的前提下，二者的降解雜質(zhì)譜應(yīng)無(wú)較大差異，但由于仿制藥的制備工藝往往不可能完全等同于參比制劑，導(dǎo)致工藝雜質(zhì)可能明顯不同，特別是一些結(jié)構(gòu)相似的肽類雜質(zhì)，這些雜質(zhì)的定性與定量研究成為多肽化學(xué)仿制藥質(zhì)量能否合理控制的關(guān)鍵，同時(shí)考慮到肽類雜質(zhì)可能存在與一般小分子化藥不具有的異常毒性和免疫原性，因此雜質(zhì)限度的確定更應(yīng)有充分依據(jù)。此外聚合物雜質(zhì)為多肽藥物中普遍存在的一種雜質(zhì)，在工藝及貯藏過(guò)程中均可能產(chǎn)生，考慮到這種雜質(zhì)更易引起特殊安全性，因此對(duì)仿制藥與參比制劑聚合物雜質(zhì)的對(duì)比研究應(yīng)加以重視。
3多肽化學(xué)仿制藥質(zhì)量研究的案例分析
3.1 硫酸魚精蛋白注射液
該品種于20世紀(jì)80年代之前已在美國(guó)上市，用于因注射肝素過(guò)量引起的出血。目前國(guó)內(nèi)有3家仿制藥上市，但獲批時(shí)間均較早，且尚未進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)。其原料藥為從大馬哈魚體內(nèi)提取的一種堿性蛋白質(zhì)的硫酸鹽，為多肽混合物，其中4種主要多肽（見(jiàn)表2）總含量超過(guò)90%，剩余由次要多肽組成。由于含有多個(gè)成串的精氨酸，且4種主要多肽氨基酸序列非常相似，因此分離純化和質(zhì)量分析均存在難度?？紤]到魚源及提取工藝的不同可能會(huì)造成仿制藥的原料藥多肽組成與參比制劑的差異，因此應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄈ娑ㄐ约岸糠治霎a(chǎn)品組成并與參比制劑對(duì)比，以確保仿制藥質(zhì)量符合要求。
原研公司曾報(bào)道[4]，使用pH=2的磷酸鹽緩沖液和低含量的乙腈作為洗脫劑對(duì)原料藥各組分進(jìn)行液相分離再進(jìn)行序列分析的方法，可確定本品中4個(gè)主要多肽的氨基酸組成和比例，并推測(cè)是二級(jí)結(jié)構(gòu)中轉(zhuǎn)角處脯氨酸周圍殘基的差異導(dǎo)致了結(jié)構(gòu)相似組分間色譜行為的不同，同時(shí)提示該方法也有望用于本品的大規(guī)模生產(chǎn)。除色譜方法外，美國(guó)FDA認(rèn)為仿制藥的研究還需要有更多的考量。他們?cè)?種不同廠家的硫酸魚精蛋白為對(duì)象進(jìn)行研究[6]，初步結(jié)果表明，不同廠家原料藥表現(xiàn)出一定的熱力學(xué)性質(zhì)（如失水量、玻璃轉(zhuǎn)化溫度、熔點(diǎn)等）的差異，但譜學(xué)性質(zhì)（如紅外、圓二色譜、一維核磁等）差異不明顯，均顯示出該原料藥在溶液中呈現(xiàn)一種無(wú)規(guī)則卷曲加少量β片層的構(gòu)象形態(tài)，同時(shí)基于QbD原則所建立的色譜方法也可有效表征不同廠家原料藥4種主要多肽組分及含量上與參比制劑的一致性。但隨后美國(guó)FDA研究人員重新審視了研究方法的合理性，進(jìn)一步認(rèn)為由于該原料藥缺乏明顯的二級(jí)結(jié)構(gòu)，紅外和圓二色譜方法可能對(duì)序列的微小變化較不敏感，因此利用核磁共振譜和質(zhì)譜作為與色譜方法的正交分析手段重新進(jìn)行了評(píng)估，以提供進(jìn)一步的支持[7]。通過(guò)測(cè)定1HNMR中Arg，Ala和Gly等關(guān)鍵氨基酸相應(yīng)特征信號(hào)的積分比值，并分析質(zhì)譜中主成分特征峰的質(zhì)荷比和相對(duì)含量，再次確認(rèn)了前次研究的結(jié)論。此外，采用核磁同核或異核二維相關(guān)譜還可建立用于本品質(zhì)控的指紋圖譜。上述方法的綜合運(yùn)用，對(duì)有效鑒別不同來(lái)源硫酸魚精蛋白間的定性及定量差異有一定的參考意義，而且還可有效區(qū)分正品與假劣產(chǎn)品（如鯡魚來(lái)源的魚精蛋白或哺乳動(dòng)物來(lái)源的蛋白等）。
3.2 醋酸地加瑞克
該品種分別于2008和2009年在美國(guó)和歐洲上市，于2018年批準(zhǔn)進(jìn)口我國(guó)，為第3代促性腺激素釋放激素（GnRH）受體阻斷劑，對(duì)雄激素依賴性腫瘤有治療作用，適用于需要雄激素去勢(shì)治療的前列腺癌患者，目前國(guó)內(nèi)外均無(wú)仿制藥上市。其原料藥為化學(xué)合成線性十肽（圖2），含7個(gè)非天然氨基酸。原料藥易溶于水，但室溫下在0.1~10mg·mL-1濃度的水溶液中會(huì)自發(fā)聚集，4h后呈凝膠狀。該過(guò)程受濃度、時(shí)間、溫度、鹽含量和蛋白質(zhì)等因素的影響，因此其制劑凍干粉復(fù)溶后雖在體外1h內(nèi)穩(wěn)定性良好，但皮下給藥接觸體液后立即形成凝膠，藥物從凝膠中緩慢釋放，從而起到長(zhǎng)效給藥的作用[8]。目前發(fā)現(xiàn)GnRH類似物在水溶液中均有自聚集現(xiàn)象，聚集體的結(jié)構(gòu)和形成凝膠的性質(zhì)因化合物而異。地加瑞克由于為兩性分子，主要是通過(guò)親水端和疏水端相互結(jié)合，并延長(zhǎng)聚集形成纖維網(wǎng)絡(luò)最終形成凝膠。原料藥的這種有條件聚集的特性對(duì)制劑最終的安全有效性影響極大，藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)均存在一定的難度。
原研公司對(duì)地加瑞克的聚集狀態(tài)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征[8]，結(jié)果表明其聚合物呈纖維狀，纖維直徑為5~15nm，且典型的X?射線衍射圖中呈現(xiàn)4.6~4.8Å的子午線方向衍射，提示了在縱向上的有序性。紅外圖譜顯示，無(wú)論在體內(nèi)還是體外，所形成的淀粉樣聚合纖維均顯示出明顯的β折疊結(jié)構(gòu)，但最大吸收峰波數(shù)略有不同，提示體內(nèi)外纖維的高級(jí)結(jié)構(gòu)在微觀上略有差異。Maji等[9]通過(guò)生化染色（如硫磺素T染色、剛果紅染色等）及電鏡觀察，進(jìn)一步證實(shí)了地加瑞克在體外的聚集性質(zhì)，并通過(guò)透析試驗(yàn)定量證明了本品的釋藥方式（即從形成的淀粉樣纖維末端逐漸釋放藥物單體）。原研品歐盟審評(píng)報(bào)告[10]及原研公司公開(kāi)專利[11]均顯示，基于原料藥的此種聚集特性，結(jié)合統(tǒng)計(jì)分析說(shuō)明制劑體外加速釋放度試驗(yàn)與光密度和黏度的實(shí)測(cè)值間具有相關(guān)性，原研公司在制劑標(biāo)準(zhǔn)中僅通過(guò)對(duì)成品部分物化性質(zhì)（如復(fù)溶溶液的黏度和光密度等）進(jìn)行相應(yīng)控制，就可確保原研品在體內(nèi)釋放行為的批間一致。
但仿制藥證明自身與參比制劑的一致僅此還不夠充分。美國(guó)FDA于2021年3月提出了該品種的個(gè)藥指南草案稿[12]，明確本品的仿制藥首先需滿足與參比制劑Q1和Q2的要求（即注射劑中輔料種類和用量應(yīng)與參比制劑相同），其次需證明原料藥一級(jí)和二級(jí)結(jié)構(gòu)及聚集性質(zhì)與參比制劑的一致性，并需要對(duì)制劑的必要物化性質(zhì)（如復(fù)溶時(shí)間、乙酸含量、外觀、光密度、黏度、pH等）、聚集動(dòng)力學(xué)和體外釋放行為進(jìn)行全面對(duì)比研究，其中聚集動(dòng)力學(xué)應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件如緩沖溶液或模擬體內(nèi)介質(zhì)中進(jìn)行，體外藥物釋放試驗(yàn)應(yīng)說(shuō)明試驗(yàn)設(shè)計(jì)的合理性，并提供必要的方法學(xué)研究和驗(yàn)證資料。各項(xiàng)要求中，聚集特性和聚集動(dòng)力學(xué)為研究的重點(diǎn)及難點(diǎn)。除可采用上文已提及的生化方法進(jìn)行評(píng)價(jià)外，美國(guó)FDA研究人員還建立了一種基于核磁共振的試驗(yàn)方法[13]。該方法提示，實(shí)時(shí)1H NMR中高場(chǎng)區(qū)0~2ppm間特征烷基信號(hào)的展寬可定性說(shuō)明溶液中聚集結(jié)構(gòu)正逐漸形成，且峰面積的變化與地加瑞克早期納米尺度下體外聚集的速率間存在數(shù)量關(guān)系，該方法對(duì)地加瑞克的一些體外聚集特征（如濃度、pH值、鹽和溫度對(duì)聚集的影響）均可進(jìn)行合理解釋，因此有望用于評(píng)價(jià)仿制藥與參比制劑的一致性。隨著技術(shù)的進(jìn)步，相信仍會(huì)有更多更好的研究方法不斷涌現(xiàn)。
3.3 醋酸格拉替雷
該品種于1996和2001年分別在美國(guó)和歐洲上市，且已有多個(gè)仿制藥獲批，用于治療多發(fā)性硬化癥，但在我國(guó)原研及仿制藥均未上市。其原料藥為由谷氨酸、賴氨酸、丙氨酸和酪氨酸以一定比例（約0.14∶0.34∶0.43∶0.09）組成的肽段共聚混合物，其結(jié)構(gòu)為：（Glu，Ala，Lys，Tyr）x·xCH3COOH，平均分子量為5~9kDa。文獻(xiàn)[14]顯示，其合成步驟首先為單個(gè)氨基酸活化并與引發(fā)劑結(jié)合，其次在一定條件下4種氨基酸以近乎隨機(jī)方式發(fā)生聚合，形成多肽混合物，再在一定條件下發(fā)生部分解聚，考慮到各氨基酸反應(yīng)活性存在差異，因此反應(yīng)條件的選擇對(duì)最終產(chǎn)品的物質(zhì)組成有較大影響，原研原料藥在批與批之間也存在一定范圍內(nèi)的差異，仿制藥與參比制劑質(zhì)量一致性比較上如何要求也具有相當(dāng)?shù)奶魬?zhàn)。
對(duì)于本品這樣的復(fù)雜藥物，采用多肽藥物質(zhì)量研究的一般方法不足以比較仿制藥和參比制劑的質(zhì)量。為此，美國(guó)FDA專門發(fā)布了個(gè)藥指南[15]，明確在確保仿制藥組成及理化性質(zhì)與參比制劑一致的基礎(chǔ)上，還需要結(jié)合制備工藝、起始原料和過(guò)程控制及生物活性測(cè)試結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。首先，仿制藥的制備工藝應(yīng)與參比制劑一致或相當(dāng)，特別強(qiáng)調(diào)了起始原料氨基酸活化形式和聚合反應(yīng)引發(fā)劑及酸裂解反應(yīng)試劑應(yīng)等同；其次，產(chǎn)品物化性質(zhì)需一致，包括4種氨基酸的含量和光學(xué)純度、分子量分布、指紋圖譜特征（如紅外、圓二色散、核磁共振等）；再次，聚合和解聚的反應(yīng)特征應(yīng)相當(dāng)，應(yīng)對(duì)聚合開(kāi)始、聚合過(guò)程中鏈增長(zhǎng)、部分解聚裂解過(guò)程中的物料結(jié)構(gòu)進(jìn)行詳細(xì)研究并與參比制劑具有可比性；最后，典型體外動(dòng)物模型上表現(xiàn)出的生物活性應(yīng)等效。不過(guò)值得注意的是，考慮到參比制劑本身的復(fù)雜性，在與其進(jìn)行充分對(duì)比研究的基礎(chǔ)上，該指南允許仿制藥的相關(guān)特性在一定范圍內(nèi)發(fā)生變動(dòng)。
有部分文獻(xiàn)探討了如何在該指南的基礎(chǔ)上去評(píng)價(jià)仿制藥與參比制劑的一致性。其中，對(duì)于物質(zhì)基礎(chǔ)的等同，美國(guó)FDA的研究人員提供了一種解決方案[16]。采用包括核磁共振、非對(duì)稱性場(chǎng)流多角度光散射分離檢測(cè)和液質(zhì)聯(lián)用等不同分析方法的組合，對(duì)比研究3批參比制劑及1批各氨基酸比例（酪氨酸和賴氨酸比例與參比制劑有2%的出入）與分子量（遠(yuǎn)高于參比制劑）均與參比制劑不同的工具化合物。結(jié)果顯示所用方法可有效檢測(cè)出2種藥物的分子量及氨基酸比例及序列的差異，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該研究提示，若干高靈敏度的正交分析方法的組合運(yùn)用，可能是分析這類極其復(fù)雜的原料藥的一種解決之道。
此外，從Mylan公司在歐盟獲批上市的本品仿制藥審評(píng)報(bào)告[17]也可以看出歐盟對(duì)該品種的審評(píng)思路。仿制藥藥企首先通過(guò)嚴(yán)格控制合成工藝參數(shù)及合理擬定放行標(biāo)準(zhǔn)確保了仿制藥批間的一致性；其次采用經(jīng)驗(yàn)證的方法說(shuō)明仿制藥與參比制劑一級(jí)及高級(jí)結(jié)構(gòu)的相似，并證明了該方法對(duì)具有相似組成但不同工藝制備樣品的區(qū)分力；再次分別對(duì)仿制藥與參比制劑中的9個(gè)主要成分進(jìn)行分離，通過(guò)多種化學(xué)和生物學(xué)手段構(gòu)建了用于評(píng)價(jià)一致性或相似性的指紋圖譜，最后借助成品及各主要成分體內(nèi)外生物學(xué)研究及臨床研究進(jìn)一步說(shuō)明了仿制藥與參比的相似性。體外藥學(xué)部分整體評(píng)價(jià)思路與美國(guó)FDA基本一致，但歐盟認(rèn)為如此復(fù)雜仿制藥的批準(zhǔn)可能仍需要臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的支持。
原研公司采用7種物理化學(xué)方法及7種生物學(xué)方法綜合評(píng)價(jià)了美國(guó)和歐洲上市仿制藥與參比制劑的相似性[18-19]。采用低靈敏度的理化方法（如分子量分布、考馬斯亮藍(lán)染色等）檢測(cè)結(jié)果顯示二者之間無(wú)明顯差異，但采用高靈敏度的方法（如反相色譜多角度光散射法、陽(yáng)離子交換色譜法等）檢測(cè)結(jié)果顯示仿制藥組成和比例均與參比制劑略有不同，此外，仿制藥細(xì)胞體外試驗(yàn)活性要略高于參比制劑，而動(dòng)物體內(nèi)研究則顯示仿制藥在給藥部位局部毒性的出現(xiàn)頻率也高于參比制劑。原研公司的研究結(jié)果進(jìn)一步印證了這類品種的極端復(fù)雜性，無(wú)論研發(fā)或是監(jiān)管均需特別審慎。
3.4 鮭降鈣素
該品種于20世紀(jì)80年代前在美國(guó)上市，用于治療骨質(zhì)疏松。其原料藥為來(lái)源于大馬哈魚體內(nèi)的一種32肽，結(jié)構(gòu)中含1個(gè)二硫鍵（圖3），目前上市品來(lái)源多為化學(xué)合成或生物重組。目前已有多個(gè)仿制藥在我國(guó)上市，但上市時(shí)間均較早，且尚未進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)。該品種結(jié)構(gòu)或物化特性相對(duì)并不復(fù)雜，但由于仿制藥制備工藝與原研藥明顯不同，因此更需關(guān)注雜質(zhì)控制的合理性，特別是來(lái)源于制備工藝的特有雜質(zhì)。對(duì)于多肽化學(xué)藥物雜質(zhì)研究來(lái)說(shuō)，通常需同時(shí)綜合應(yīng)用不同原理的方法進(jìn)行交叉研究，重點(diǎn)關(guān)注方法對(duì)肽類雜質(zhì)的分離和檢出能力。
美國(guó)藥典（USP）鮭降鈣素原料藥各論推薦采用高效液相色譜法控制合成來(lái)源鮭降鈣素原料藥中的有關(guān)物質(zhì)，但未規(guī)定特定雜質(zhì)，僅控制一般單雜與總雜；制劑各論中未對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制。美國(guó)FDA結(jié)合審評(píng)經(jīng)驗(yàn)，建立液質(zhì)聯(lián)用方法對(duì)已上市某種鮭降鈣素鼻腔噴霧劑進(jìn)行研究[20]，檢測(cè)到該產(chǎn)品中總雜水平要遠(yuǎn)高于USP推薦的有關(guān)物質(zhì)方法的檢出水平，同時(shí)新方法還可對(duì)各已知雜質(zhì)及10個(gè)未知雜質(zhì)進(jìn)行定性和定量，表明新方法較藥典方法具有更高的雜質(zhì)分離和檢出能力，也印證了采用不同原理的方法進(jìn)行多肽藥物雜質(zhì)研究工作的必要性。美國(guó)FDA利用該方法對(duì)已上市的13種鮭降鈣素鼻噴劑進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明不同來(lái)源制劑的質(zhì)量參差不齊，為進(jìn)一步加強(qiáng)監(jiān)管及提升行業(yè)總體研究水平提供了依據(jù)。此外，Windisch等[21]報(bào)道鮭降鈣素在高溫條件下的降解實(shí)驗(yàn)中有明顯的二聚物或多聚物雜質(zhì)生成，這類聚合物雜質(zhì)在工藝過(guò)程中，特別是當(dāng)仿制藥原料藥制備工藝或制劑所用輔料與參比制劑有較大差異時(shí)，都有可能產(chǎn)生。這類雜質(zhì)對(duì)多肽藥物的安全性有較大影響，因此需要特別關(guān)注。
從上面幾個(gè)例子可以看到，對(duì)于復(fù)雜多肽藥物，特別是涉及多組分、存在高級(jí)結(jié)構(gòu)或具有聚集特性的多肽，在進(jìn)行仿制藥研發(fā)時(shí)，應(yīng)采用不同原理的分析方法并結(jié)合品種特點(diǎn)對(duì)比參比制劑進(jìn)行研究，以全方位說(shuō)明仿制藥與參比制劑的一致性，必要時(shí)還應(yīng)選擇合適的指標(biāo)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中進(jìn)行相應(yīng)控制。另外，在仿制藥研發(fā)早期即應(yīng)對(duì)工藝可能引入的雜質(zhì)包括聚合物雜質(zhì)采用適宜方法進(jìn)行充分研究，根據(jù)研究結(jié)果制定合理的控制策略，雜質(zhì)的限度應(yīng)以參比制劑雜質(zhì)實(shí)際水平為依據(jù)，并參照相關(guān)指南合理擬定，必要時(shí)關(guān)注雜質(zhì)的特殊安全性。還應(yīng)注意的是，有些原研多肽由于上市較早，當(dāng)時(shí)研究手段有限，質(zhì)量研究和控制標(biāo)準(zhǔn)放在當(dāng)下可能并不充分，在進(jìn)行仿制藥開(kāi)發(fā)時(shí)還應(yīng)基于產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及結(jié)構(gòu)與療效、安全性的關(guān)系，建立新的質(zhì)量研究方法、調(diào)整控制策略。
4結(jié)語(yǔ)
綜上所述，多肽仿制藥的研究應(yīng)符合仿制藥研究的一般要求，同時(shí)要考慮其技術(shù)上的特殊性，仿制藥結(jié)構(gòu)和物化特性與參比制劑的等同及對(duì)雜質(zhì)的合理控制是獲得成功的關(guān)鍵，應(yīng)結(jié)合品種特點(diǎn)科學(xué)制定研究方案。目前市場(chǎng)上多肽藥品數(shù)量很多，但質(zhì)量良莠不齊，多肽藥物的研發(fā)和監(jiān)管水平均亟須提升。2018年國(guó)務(wù)院辦公廳發(fā)布了《關(guān)于改革完善仿制藥供應(yīng)保障及使用政策的意見(jiàn)》[22]，提出要制定鼓勵(lì)仿制的藥品目錄，目前已發(fā)布的2批目錄[23-24]共計(jì)50個(gè)品種中，就包括了格拉替雷和普卡那肽等多個(gè)多肽藥物品種，說(shuō)明國(guó)家非常重視多肽仿制藥的發(fā)展。同時(shí)該文件還要求健全產(chǎn)學(xué)研醫(yī)用協(xié)同創(chuàng)新機(jī)制，建立仿制藥技術(shù)攻關(guān)聯(lián)盟，發(fā)揮企業(yè)的主導(dǎo)作用和醫(yī)院、科研機(jī)構(gòu)、高等院校的基礎(chǔ)支撐作用，加強(qiáng)仿制藥的技術(shù)攻關(guān)。希望通過(guò)本文與業(yè)界對(duì)多肽化學(xué)仿制藥進(jìn)行交流，并促進(jìn)更多更好的多肽仿制藥加快上市，提高我國(guó)患者的用藥可及性。
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