1、?；B氮物法

早在 1902 年，就有人將?；B 氮物法引入到肽化學(xué)中，因此，該方法是最古老的縮合方法之一，在肽縮合反應(yīng)過程中，疊氮物法對氨基酸很 少發(fā)生消旋作用，因此，該方法一直被肽合成工作者廣 泛使用。最近我國學(xué)者李勤耕等利用此種方法成 功合成出一系列谷氨酰胺類抗腫瘤化合物。 疊氮法接肽分為三步，首先，羧基部分被甲酯、乙 酯、芐酯等保護的肽在室溫下進(jìn)行肼解生成酰肼，然后 酰肼在低溫(-15℃以下) 和酸性條件下與亞硝酸化 物反應(yīng)生成疊氮物，最后用有機堿調(diào)節(jié)pH 8-9，加入氨基組分完成接肽反應(yīng)。機理如下圖。

除此以外，人們還發(fā)現(xiàn)了一種磷酸酯型縮合試劑 DPPA，其可以不經(jīng)肼解，直接由羧基變成疊氮鹽。與 傳統(tǒng)疊氮物法相比，由于其不需要酰肼中間體，簡化了 反應(yīng)步驟，而且反應(yīng)條件更加溫和，因此受到人們的歡迎。機理如下圖。

2、混合酸酐法 

該方法是指先將保護的氨基酸的 羧基制成高活性的混合酸酐，之后與氨基縮合生成肽的方法。混合酸酐法是上世紀(jì) 50 年代初期開始發(fā)展 起來的，開始使用的制備混合酸酐的試劑主要是二苯 基磷酸，然后是苯甲酸，現(xiàn)在應(yīng)用最廣的是氯甲酸烷基 酯類，主要有氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯和氯甲酸異丙 酯?；旌纤狒ň哂蟹磻?yīng)速度快、產(chǎn)物純度高、產(chǎn)率高、經(jīng)濟性好等優(yōu)點，因此備受當(dāng)今藥學(xué)工作者的厚 愛。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)宓鵬程等人于2007 年成功利用此法合成出了胸腺五肽(TP5) 中間體 Fmoc-Tyr(t-Bu)-WangResin。反應(yīng)過程中，羧基組分首先與氯甲酸異丁酯在低溫下(-15℃左右) 反應(yīng)生成混合酸酐，然后在叔胺存 在的堿性條件下與氨基組分反應(yīng)生成肽。機理如下圖。

3、碳二亞胺法

在碳二亞胺法類方法發(fā)展過程中，二環(huán)己基碳二亞胺( DCC) 首先用于肽合成，并且得到廣泛應(yīng)用，DCC 相對便宜，而且可溶于肽合成常用試劑，但是用 DCC 作縮合劑會有二環(huán)己基脲( DCU)生成DCU 在水中和有機溶劑中均有一定的溶解度，致使 在產(chǎn)物純化過程中很難將其除盡。為此人們開發(fā)了水 溶性的碳二亞胺 EDC 來代替DCC，反應(yīng)完后只需要用 酸或水洗滌即可除去反應(yīng)生成的脲，有效的解決了這 個問題。劉國都等在合成活性三肽法氏囊素中也 用到此方法。碳二亞胺類的縮合試劑機理如下圖?？s合試劑先與羧基組分生成活性中間體，然后再與胺基組分在堿性條件下完成肽鏈增長反應(yīng)。

4、酰鹵法

該法類似于有機化學(xué)方法，用酰氯活化 羧基，然后在室溫或低溫條件下形成酰胺，是一種常用的方法。然而，此種方法在試劑應(yīng)用中只用于 Fmoc-保護的氨基酸，原因在于 Fmoc 在酸性條件下非常穩(wěn) 定，而其他保護基保護的氨基酸很少用該法進(jìn)行合成， 因為多數(shù)學(xué)者認(rèn)為酰氯法“過度活潑”且易發(fā)生消旋等 多種副反應(yīng)。

5、苯并三唑型( BOP 族)

以 BOP 為第一代苯并三 唑型的縮合試劑可以說是縮合試劑里的一場革命，因為其接肽的效率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于DCC，引起消旋的風(fēng)險也明顯減小。之后，人們又發(fā)現(xiàn)了同類型的縮合試劑 HBTU、ByBOP、TBTU等。其共同點就是縮合試劑在有機堿的參與下先與羧基組分反應(yīng)，生成羧酸的苯并三 唑酯活性中間體，然后再與氨基組分反應(yīng)生成目標(biāo)多肽，如下圖所示。