氧化法： 固相中加入 10～20 倍摩爾量的 I2 反應 2 小時。 注意：裂解的時候勿加 EDT。 H2O2 氧化法： 粗肽溶解在純化水中，濃度約 1g/L（此時取樣做 HPLC 分析），調(diào)節(jié) PH 值 7.2～7.8，加入10～20 倍摩爾量的 H2O2 反應 15min，取樣做 HPLC 分析。氧化完后，調(diào)節(jié) PH 值至 4.0。

訂書肽的合成與普通多肽合成的區(qū)別在于在固相合成肽鏈過程中引入兩個含有α-甲基，α-烯基的非天然氨基酸，然后兩個非天然氨基酸之間發(fā)生烯烴復分解反應環(huán)化構成穩(wěn)定α-螺旋結構構象的全碳支架，進而合成訂書肽。

胰島素是由胰臟內(nèi)的胰島β-細胞受內(nèi)源性或外源性物質如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等物質刺激而分泌的一種蛋白質激素。胰島素是機體內(nèi)唯一降低血糖的激素，同時促進糖原、脂肪、蛋白質合成，因此，胰島素在人體新陳代謝中起著重要作用。如果機體內(nèi)胰島素的量不足就會引發(fā)糖尿病，目前胰島素依然是治療糖尿病的特效藥，因此胰島素的人工合成技術一直是生物醫(yī)藥領域研究的熱點。現(xiàn)在采用的基因工程技術有兩種方法可以讓微生物發(fā)酵產(chǎn)生胰島素。一種就是先在大腸桿菌中分別合成胰島素A鏈和B鏈，然后在體外用化學方法將兩條鏈連接成胰島素。而另一種是采用分泌型載體表達胰島素原，然后將其轉化為胰島素。

多肽藥物在治療上的重要性，越來越引起廣大藥學工作者的重視。根據(jù)肽鏈的構成可將多肽分為同聚肽(Homomeric)和雜聚肽(Heteromeric)兩大類，前者完全由氨基酸組成，后者是由氨基酸部分和非氨基酸部分組成的，如糖肽。根據(jù)肽鍵的結構又分為直鏈肽和環(huán)肽。其中直鏈肽的研究最為廣泛和深入，尤其在直鏈肽的合成技術方面無論是液相法還是固相法都已成熟。雖然許多直鏈肽體外具有很好的生物活性和穩(wěn)定性，但是進入體內(nèi)后活性很快消失。因為體內(nèi)環(huán)境復雜，存在各種各樣的酶。直鏈肽在酶的作用下很快降解，導致活性喪失。另外，直鏈肽在液相里的構象柔性使得不大容易符合受體的構象要求。這些不利因素造成多肽藥物仍有許多問題有待解決。為了得到生物活性優(yōu)秀半衰期長，受體選擇性高的多肽，文獻報道過很多多肽改造的方法，其中包括將直鏈肽改造成環(huán)肽。這種大環(huán)分子具有明確的固定構象，能夠與受體很好地契合，加上分子內(nèi)不存在游離的氨端和羧端使得對氨肽酶和羧肽酶的敏感性大大降低。一般地說，環(huán)肽的代謝穩(wěn)定性和生物利用度遠遠高于直鏈肽[13]。鑒于環(huán)肽的諸多優(yōu)點，近年來對多肽研究的熱點已轉移到環(huán)肽的合成和生物評價上。

Classic Click Chemistry使用銅Cu（I）來催化炔烴與疊氮化物的1,3-偶極環(huán)加成反應生成1,2,3-三唑.1,2 Cu（I）的來源包括銅（I ）碘化物，溴化銅（I），銅屑或硫酸銅（II）（CuSO4）和還原劑。1但是，銅（I）的熱力學不穩(wěn)定，很容易氧化成惰性銅（II），所以通常需要使用適當?shù)尿吓潴w制備銅催化劑。

PEG酸是一類PEG化合物，其一端具有一個羧酸基，另一端具有一個羥基，疊氮基，氨基，馬來酰亞胺或三鍵。 這些試劑具有確定的分子量和間隔長度，并用于修飾蛋白質或含有胺基的表面，例如量子點，自組裝單分子層和磁性顆粒。 用PEG間隔基對固體表面進行功能化可顯著降低非特異性蛋白質結合。

不需要偶聯(lián)劑。 PEG-NH2可以在pH 7-9的條件下用NHS活化酯進行有效的結合。

一、什么是熒光標記？        熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當從激發(fā)態(tài)恢復基態(tài)時，發(fā)出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡便等優(yōu)點，使得熒光標記物在許多研究領域的應用日趨廣泛。 二、熒光標記的作用        熒光標記物質在蛋白的功能研究、藥物篩選等領域也有著廣泛的應用。人們利用利用熒光標記的多肽來檢測目標蛋白的活性，并將其發(fā)展的高通量活性篩選方法應用于疾病治療靶點蛋白的藥物篩選和藥物開發(fā)（例如，各種激酶、磷酸酶、肽酶等）。因此，多肽的熒光修飾，同樣是多肽合成領域的重要內(nèi)容。

由氨基酸組成的多肽數(shù)目驚人，情況十分復雜，由100個氨基酸聚合成線形分子，可能形成20100種多肽。僅由Gly、Val、Leu三種氨基酸就可組成六種三肽。因此，多肽結構的確定，尤其是長鏈多肽結構的確定是一個相當重要也相當復雜的工作。純的、單一的多肽是保證肽結構確證的前提條件。杭州專肽生物可對多肽提供1-5種檢測報告。 (一) 多肽的結構分析方法——質譜 經(jīng)典的多肽測序方法包括N末端序列測定的化學方法，如 Edman法、C末端酶解方法及C末端化學降解法等，這些方法都存在一定缺陷。例如作為多肽和蛋白質序列測定標準方法的N末端氨基酸苯異硫氰酸酯( phenylisothiocyanate，PITC)分析法(即 Edman法，又稱PTH法)。

一、固相合成多肽的聚合物載體及連接分子 1.聚合物載體 固相合成多肽需要有固相載體及連接固相與反應物的連接分子,正確選擇載體和連接分子決定著固相合成法的成功。固相合成多肽用的載體多數(shù)采用聚苯乙烯及二乙烯基苯和苯乙烯共聚物等高聚物的衍生物,如氯 樹脂、Pam樹脂、王氏樹脂和氨基樹脂等。載體樹脂的溶脹狀況對縮合試劑及羧基組分的自由擴散,對肽鏈之間的聚集等與縮合反應有關的因素有明顯影響。為了使載體有較好的溶脹性,且有較大的網(wǎng)絡空間足以容納不斷增長的較長的肽鏈,而且便于反應物進入載體的內(nèi)部,一般均采用1%～2%交聯(lián)度的聚苯乙烯珠狀樹脂或微孔樹脂。     2.連接分子 固相合成多肽曾經(jīng)使用過鍵合不同連接分子的聚合物,這些連接分子為含有氯甲基、巰甲基、酰氯基、對苯甲?；⒎蓟酋Ｂ然?、烯丙醇基、丁二酰基、鄰硝基芐醇基及二苯氯硅烷等的雙官能團化合物。一個理想的連接分子必須在整個合成過程中十分穩(wěn)定,并在合成后可以定量的切割下來而又不破壞合成的目標分子。選擇適合的連接分子還應根據(jù)與樹脂相連的肽的C末端的結構類型,裂解后生成相應的羧酸、酰胺或氨基醇等衍生物。